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激素类药物主要包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质醇激素等。激素类药物的应用，能够较为有效地提高养殖业的经济效益，但同时激素的滥用对人体健康的危害也是不容忽视的。一些养殖户片面追求经济利益，从而过度使用激素类药物，导致饲养动物体内的激素严重超标，所生产的肉类食品中也有大量的激素残留。如果食用这样的肉类食品，也会造成人体自身激素紊乱，给人体健康造成很大威胁。

实验部分

应用范围：动物源性食品/猪肉/猪肝/鸡蛋/牛奶/牛肉/鸡肉/虾

检测方法：液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的目标化合物经均质，酶解，用甲醇-水溶液提取，经固相萃取富集净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量

前处理仪器：电子天平（感量0.0001 g和0.01 g）；组织匀浆机；涡旋混合器；恒温振荡器；超声清洗仪；离心机（10000 r/min）；固相萃取装置；氮吹仪；pH计；移液器。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

实验制备

1.动物肌肉、肝脏、虾

从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，剔除筋膜，虾去除头和壳。用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18 ℃以下冷冻存放。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，充分摇匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

3.鸡蛋

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，去壳后用组织捣碎机充分搅拌均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

前处理方法

1.提取

称取5g试样（精确至0.01 g）于50mL具塞塑料离心管中，准确加入混合内标溶液（100μg/L）100μL和10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液，涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37℃±1 ℃振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入25mL甲醇超声提取30min，0℃～4℃下10000r/min离心10min。将上清液转入洁净烧杯，加水100mL，混匀后待净化。

2.净化

分别用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3），6mL甲醇，6mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱（500mg，6 mL），将提取液以2mL/min～3mL/min的速度上样。将小柱减压抽干。再将用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3）活化好的氨基固相萃取柱（500mg，6mL）串接在ENVI-Carb小柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗脱并收集洗脱液，取下ENVI-Carb小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗氨基柱，合并洗脱液后在微弱的氮气流下吹干，用1 mL甲醇-水（1+1）溶解残渣，供仪器测定。

注意事项

1.激素类标准物质及内标用甲醇配成1.0 mg/mL标准储备液，在-18 ℃以下避光保存，可稳定使用12个月。

2.如果有条件，建议每种标准物质使用其对应的同位素内标进行校正。实在没有对应的同位素内标，选择与其化学性质最近似的同位素内标进行校正（参考国标方法）。

3.β-葡萄糖醛酸酶只能冷藏，不能冷冻保存，否则会失活。

4.由于上样液比较多，可以自制一种可控流速的大针筒，固定在ENVI-Carb小柱上面，一次加上全部提取液，提高净化富集效率。

5.由于检测项目比较多，在浓缩过程中需要微弱氮气缓缓吹至近干，控制温度不高于35 ℃。

6.国标方法中激素类标准物质比较多，需要根据检测的项目，制定不同的色谱方法。如果检测项目比较多，建议使用一根150 mm长的色谱柱进行分离。根据出峰时间，使用正负离子切换模式进行扫描，提高检测效率。

参考文献：

GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

猪肉、猪肝、鸡蛋、牛奶、牛肉、鸡肉和虾中激素类药物残留量测定的前处理流程图

激素类药物信息表

（来源：坛墨质检科技股份有限公司）

动物源食品中激素多残留测定的前处理方法

抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等。金刚烷胺和金刚乙胺是第、一批被允许用来治/疗A型禽流感病毒的特/效药，两者都属于穿入和脱壳YZ剂，YZ病毒的繁殖。研究发现，金刚烷胺可以引起角膜水肿，高剂量摄入时表现出一定的毒性。美金刚和金刚乙胺互为同分异构体，但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中/枢神经系统的治/疗，具有一定的神经毒性。吗啉胍又被称为病毒灵，是一种广谱抗病毒类药物，对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治/疗/效果，剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应。我国在1999年12月将吗啉胍列为禁用药，2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药，禁止用于动物生产。虽然抗病毒/药属动物禁用药物，但其在动物养殖过程中依然被广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该类药物，易导致药物在畜禽机体内残留与富集，不仅会造成畜禽中毒，也会引起病毒耐药毒株的出现，使抗病毒/药物有效性降低，其耐药性也有转移扩散到人体的风险，对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4253-2015，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围：鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中7种抗病毒类药物用三氯乙/酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

前处理仪器：分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机、高速冷冻离心机（4 ℃冷冻，18000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋混合器；pH计；氮吹仪；固相萃取装置。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器内，并标明标记；鸡肉制品取鸡肉部分；蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁容器中，并标明标记。

制样操作过程中，应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 ℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2 ℃～6 ℃贮存72 小时。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入0.1 mL内标标准工作溶液（0.1 μg/mL），加入15 mL三氯乙/酸乙腈（90+10）溶液，加盖后在超声波发生器中超声10 min，再旋涡混匀3 min，4 ℃条件下15000 r/min离心5 min，取出上清液，再加入10 mL三氯乙/酸乙腈溶液重复提取一次，离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度。

2.净化

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱（60 mg，3 mL），准确移取5 mL上清液加入到小柱中，依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗，弃去全部流出液；然后真空抽干小柱5 min，用4.0 mL洗脱溶液（氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95）洗脱至10 mL玻璃管中，在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液（70+10+20）溶解残渣，涡旋30 s后过0.2 μm滤膜，供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

注意事项

1.标准物质分别用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液，其中阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜溶解，再用50 %甲醇水配成100 μg/mL的标准储备液，在-18 ℃避光保存，可使用6个月。

2.本方法使用了金刚烷胺D6、美金刚D6、阿昔洛韦D4同位素内标进行回收率的校正。

3.本方法使用三氯乙/酸-乙腈提取并沉淀蛋白，MCX固相萃取柱净化。

4.MCX固相萃取柱的净化过程是“酸上样、碱洗脱”。淋洗后一定抽干小柱，防止水相进入洗脱液。氨化洗脱液一定要现用现配，防止氨水挥发，导致目标化合物洗脱不下来。

5.氮气浓缩过程中，吹至近干潮湿状态，定容后采取涡旋加超声的方式复溶，可以提高回收率。

6.金刚烷胺的残留检测，有GB 31660.5-2019作为依据，应根据需求进行选择使用。并注意其他药物检测方法的更新。

参考文献

SN/T 4253-2015 出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱―质谱/质谱法

图1 抗病毒类药物残留量测定的前处理流程图

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氯霉素类药物的危害及检测目的

氯霉素类药物主要包括氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，又称为酰胺醇类，属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有yi制作用。由于氯霉素合成容易价格低，ZL食品动物传染性疾病效果较好，所以有在养殖过程中使用氯霉素的违法行为，从而造成动物源性食品中氯霉素残留。研究证明氯霉素可引发人体造血系统疾病，产生细菌耐药性等危害。2020年我国农业农村部公告第250号，将氯霉素及其盐、酯列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将氯霉素类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 22338-2008，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯霉素类药物

应用范围：动物源性食品/水产品//畜禽产品/畜禽副产品

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：针对不同动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留，分别采用乙腈、乙酸乙酯-yi醚或乙酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱进行净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，氯霉素采用内标法定量，甲砜霉素和氟甲砜霉素采用外标法定量。

前处理仪器：

高速组织捣碎机；均质器；旋转蒸发仪；分析天平；移液枪（200 μL 和1 mL）；心形瓶（100 mL 棕色）；分液漏斗（200 mL）；聚四氟乙烯离心管（50 mL）；离心机；涡旋混合器；固相萃取装置。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

试样制备

从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎或混匀，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样，于-20 ℃条件下保存。

前处理方法

1.提取

动物组织（肝、肾除外）与水产品

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液和30 mL乙腈，匀浆，离心5 min。将上清液移入250 mL分液漏斗中，加15 mL乙腈饱和的正己烷，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至100 mL棕色心形瓶中。残渣中再加入30 mL乙腈，振摇3 min，离心5 min，取上清液转移至同一分液漏斗，振荡5 min，静置分层，转移乙腈层至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5 mL正丙醇，于40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

动物肝、肾组织

称取试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入30 mL乙酸钠缓冲液（0.1 mol/L pH 5.0），均质2 min，加入300 μL β-葡萄糖醛酸苷酶，于37 ℃温育过夜。消解样品中加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，20 mL乙酸乙酯-yi醚（75+25），振摇2 min，离心5 min。取上层有机层入心形瓶中，在40 ℃水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解残渣。

蜂蜜

称取蜂蜜试样5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入100 μL氯霉素氘代内标（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，5 mL水，混匀，再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，移取有机层到100 mL棕色心形瓶中，于离心管中再加入20 mL乙酸乙酯，振摇2 min，离心5 min，合并有机层于棕色心形瓶中，40 ℃水浴中旋转蒸发至干，3 mL水溶解残渣，混匀。

2.净化

动物组织与水产品

用5 mL丙酮-正己烷（1+9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将残渣溶解溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）洗脱，收集洗脱液于心形瓶中， 40 ℃水浴中旋转蒸发至近干，氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

蜂蜜

分别用5 mL甲醇，5 mL水活化EN固相萃取柱，将提取液转移上柱，用5 mL水淋洗，用玻璃棒压干1 min，用3 mL乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用1 mL水定容，定容液过0.45 μm滤膜至进样瓶，待测定。

国标解读及注意事项

1.氯霉素类标准物质用乙腈配成500 μg/mL标准储备液在4 ℃避光条件下保存可以使用6个月。

2.不同的基质使用不同的提取和净化方法，注意内脏组织需要酶解，β-葡萄糖醛酸苷酶只能冷藏，不能冷冻保存，否则会失活。

3.用水定容后，采用涡旋加超声方式复溶，可以提高复溶效果。

4.由于质谱检测过程中扫描方式为负离子扫描（ESI-），建议专门使用一台液质仪，只进行负离子扫描的检测，保证检测灵敏度。

5.可以在前处理过程中加入甲砜霉素和氟甲砜霉素相对应的同位素内标物质，校正回收率。

参考文献:GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定

动物组织（肝、肾除外）与水产品中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

动物肝、肾组织中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

蜂蜜中氯霉素类药物残留量测定的前处理流程图

*氯霉素类药物信息表

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硝基咪唑类药物（nitroimidazole,NMZs）是一类具有抗原虫感染和抗厌氧菌的硝基杂环类KJ药物，其具有kangjun和抗原虫作用。近年来作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产中，同时也是一种生长促进剂，以促进畜禽的生长及改善饲料的转换率。由于这类化合物含有的硝基杂环类物质具有潜在致癌、致畸和致突变作用，因此欧美等发达国家已禁止在食源性动物中使用硝基咪唑类药物。我国也对硝基咪唑类药物进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药ZD残留限量》中仅规定了甲硝唑和地美硝唑两种物质允许作ZL使用，但不得在动物性食品中检出；同年农业农村部公告第250号，将洛硝达唑、替硝唑列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中。

本文阐述了如何将硝基咪唑类化合物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 21318-2007，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

应用范围

猪肉/鸡肉/牛肉/猪肝/鸡肝/牛肝/猪肾/牛肾/鱼肉/奶粉/蜂蜜

方法原理

样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以凝胶色谱（GPC）净化，再经固相萃取（SPE）净化，采用液相色谱/串联质谱确证，外标法定量测定。

前处理仪器

凝胶色谱仪（配有馏份收集浓缩器）；组织捣碎机；均质器；超声波发生器；旋转蒸发器；高速离心机；氮吹仪；固相萃取装置；具塞锥形瓶（250 mL）；分液漏斗（250 mL）；浓缩瓶（50 mL、250 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

01提取

肌肉组织、脏器组织样品及水产品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 g硅藻土（80目～120目）与样品充分混匀，再依次加入5 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），高速均质提取3 min。将提取液移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

蜂蜜、乳及乳制品样品准确称取约20 g样品（精确至0.1 g）于250 mL具塞锥形瓶中，加入10 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮（3+1），超声波提取30 min。移入离心管中，于10000 r/min离心2 min，将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮（3+1）重复提取两次，合并提取液。

02液液分配

将提取液于40 ℃水浴中旋转浓缩至只剩水相，并转移至250 mL分液漏斗中，加入50 mL饱和氯化钠水溶液和25 mL乙酸乙酯，振摇3 min，静置分层，收集乙酸乙酯相。水相再用20 mL乙酸乙酯重复提取两次，合并乙酸乙酯相。经无水硫酸钠柱脱水，收集于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解残渣，并用0.45 μm滤膜过滤，待净化。

03净化

凝胶色谱（GPC）净化凝胶色谱净化条件如下：净化柱：700 mm×25 mm，Bio Bcads S X3，或相当者；流动相：乙酸乙酯-环己烷（1+1）；流速：4.7 mL/min；样品定量环：5.0 mL；预淋洗体积：50 mL；洗脱总体积：210 mL；开始弃去体积：90 mL；收集体积：90 mL；ZH弃去体积：30 mL。

04凝胶色谱净化步骤如下

将5 mL待净化液按照凝胶色谱净化条件进行净化，合并馏份收集器中的收集液于250 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入5 mL甲醇以溶解残渣，待净化。

05固相萃取（SPE）净化

使用前用5 mL甲醇预淋洗C18固相萃取柱（1 g，6 mL），将5 mL溶解液倾入C18固相萃取柱中，以1 mL/min的速度收集流出液，再用10 mL甲醇进行洗脱。收集全部洗脱液于50 mL浓缩瓶中，于40 ℃水浴中旋转浓缩至干。用甲醇溶解并定容至1.0 mL，经0.45 μm滤膜过滤后，供液质测定和确证。

国标解读及注意事项

1.硝基咪唑标准物质用甲醇配成1000 μg/mL的标准储备液，在0 ～4 ℃条件下避光保存，可使用12个月。2.如果有条件，建议凝胶色谱净化系统中配合使用紫外检测器，准确监测目标化合物及杂质的流出情况。

3.固相萃取净化过程中，C18柱作为净化柱使用，注意上样过程中就需要收集流出液，再和洗脱液进行合并。

4.国标方法中使用基质添加标准曲线，外标法进行回收率的校正。注意做肉类样品的基质添加标准曲线前，先进行洗涤，然后加标，再进行后续提取净化等流程。

5.建议使用硝基咪唑标准物质相对应的同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献：GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法

图1 肌肉组织、脏器组织样品及水产品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

图2 蜂蜜、乳及乳制品样品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图

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甲苄喹啉和癸氧喹酯的危害及检测目的

甲苄喹啉和癸氧喹酯同属于喹啉类抗球虫药物，用于预防及ZL球虫病。这类抗球虫药具有毒性低、耐受性好、代谢快的优点，应用非常广泛。甲苄喹啉的抗球虫效力较强，是癸氧喹酯的两倍。癸氧喹酯是WY被日本、欧盟、美国和ZG政府批准使用的化学型抗球虫药，与目前ZG允许使用的兽药饲料添加剂无任何配伍禁忌。尽管这类抗球虫药物的毒性较低，但抗球虫药物的使用易导致球虫出现抗药性，并且畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了癸氧喹酯在鸡靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将甲苄喹啉和癸氧喹酯从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 2444-2010，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：甲苄喹啉、癸氧喹酯

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：采用乙腈提取试样中残留的甲苄喹啉和癸氧喹酯，提取液经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法定量。

前处理仪器： 

固相萃取装置；氮吹浓缩仪；均质器；旋涡混匀器；离心机（5000 r/min以上）；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯离心管（50 mL和15 mL，带螺旋盖）；容量瓶（100 mL和1000 mL）；往复式振荡器。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

1. 鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋和牛肝

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于零下18 ℃ 以下冷冻存放。

2. 牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 冷藏存放。

制样要求：在制样的操作过程中，应防止样品污染。

前处理方法
       1.提取

称取样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL乙腈，旋涡混匀1 min，在往复式振荡器上振荡提取5 min，3000 r/min离心5 min，将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈，重复提取一次，5000 r/min离心5 min，合并乙腈层。在乙腈提取液中加入过量氯化钠，旋涡混匀1 min，5000 r/min离心3 min。取上层乙腈层5 mL于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至3 mL，加水定容至10 mL，待净化。

2.净化

将待净化液转入HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化），以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，弃去流出液。再分别用3 mL 30 %乙腈水溶液，3 mL水淋洗，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至近干，用样品定容溶液（乙腈+水1+1加0.1 %甲酸）溶解并定容至1.0 mL，旋涡混匀后过0.2 μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.甲苄喹啉标准物质用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存；癸氧喹酯标准物质用san氯甲烷配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存。

2.本方法使用乙腈分两次提取目标化合物，加盐净化后，再使用HLB柱进行富集净化，相当于1 g试料进行上机检测。

3.使用乙腈作为提取溶剂时，需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好，但是容易使肌肉样品“抱团”不分散，影响目标物的提取率。所以在加入乙腈后应立即进行涡旋处理，使肉样分散。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证吸附解离的效果。

5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水，防止水进入洗脱液中，导致后续浓缩过程中洗脱液不能被吹干。

6.本方法使用基质加标流程曲线进行定量，还可以使用癸氧喹酯相对应的同位素内标配制标准曲线。

参考文献

SN/T 2444-2010进出口动物源食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理流程图

甲苄喹啉和癸氧喹酯信息表

动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量测定的前处理方法

敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷的危害及检测目的

敌bai虫、敌敌畏与蝇毒磷均属于有机磷农药，作为一种杀虫剂，有机磷农药具有广谱、GX、低毒、使用方便等特点，广泛应用于农业、畜牧业、水产、林业等方面的防虫或杀虫工作。有机磷农药的广泛使用，在给人们增加利益的同时也给环境造成了严重的污染。大量食用含有敌bai虫等农药残留的食物会导致机体正常生理功能的失调，引起病理改变和毒性危害。因此，为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了敌bai虫和敌敌畏在牛和猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 23200.94-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷

应用范围：畜、禽分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。

前处理仪器： 

分析天平（感量0.01 g 和0.0001 g）；超声波清洗器；旋涡混匀器；旋转蒸发仪；离心机（5000 r/min）；均质器；0.45 μm微孔滤膜。

检测仪器：UHPLC-MS/MS+ESI源

试样的制备与保存

1. 分割肉

取样品中有代表性的约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

2. 肠衣

取有代表性样品约100 g，用剪刀剪碎至2 毫米以下，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

3. 蜂蜜

取有代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

试样保存与制样要求：分割肉、肠衣、蜂蜜等试样于零下18 ℃ 以下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.分割肉

准确称取5 g均匀试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入5 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，用均质器（10000 r/min）均质2 min，4000 r/min离心3 min，将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷均质提取两次。离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2.肠衣

准确称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入2 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声30 min，冷却后将有机相过滤转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷混匀超声提取两次，离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3.蜂蜜

称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上混匀1 min，以3000 r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯提取液收集于浓缩瓶中，残渣再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下减压浓缩至约3 mL后转移至10 mL离心管中，用5 mL乙酸乙酯分两次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于离心管中，用氮气吹干。加1.0 mL乙腈溶解残渣，并过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用甲醇配成100 μg/mL的标准储备液，在0 ℃～4 ℃冷藏避光保存，可使用3个月。

2.本方法中肉类和肠衣的提取净化方式为：二氯甲烷提取三次，无水硫酸钠除水，环己烷除脂；蜂蜜的的提取净化方式为：水溶解后，乙酸乙酯提取两次。三种基质均相当于5 g试料上机检测。

3.根据基质中含水量的多少，调整无水硫酸钠的用量。

4.本方法采用多次提取的方式提高目标化合物的回收率。

5.本方法使用基质曲线进行定量，还可以使用三种化合物相对应的同位素内标配制标准曲线，进行回收率的校正。

参考文献

GB 23200.94-2016 食品安全国家标准 动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1分割肉中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

图2肠衣中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

图3蜂蜜中敌bai虫、敌敌畏和蝇毒磷残留量测定的前处理流程图

 文章来源：标准物质ZX（https://www.gbw-china.com/)

猪肾和肌肉组织中氯丙嗪残留量测定的前处理方法

氯丙嗪的危害及检测目的 

氯丙嗪属于吩噻嗪类药物，可作用于中qu神经系统，故被作为中qu多巴胺受体的阻断剂，具有镇静、催眠、镇吐、抗晕眩等功效。当前，氯丙嗪常被一些养殖户违规添加至家畜饲料中，目的是通过抑zhi家畜运动来达到“短期育肥”的效果。或在家畜长途运输过程中减少其应激反应，进而降低死亡率。氯丙嗪药物的滥用造成其在动物体内大量残留，并通过食物链进入人体，长期蓄积会引发人体食物中毒、肝脏和肾脏病变等，直接危害人体健康。目前，欧盟明令规定“不得在动物源性食品中检出氯丙嗪”。我国也对氯丙嗪进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药zui大残留限量》中规定了氯丙嗪允许作zhi疗使用，但不得在动物性食品中检出。

本文阐述了如何将氯丙嗪从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 20763-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯丙嗪

——————应用范围：猪肾/肌肉组织——————

液相色谱-串联质谱法

方法原理：氯丙嗪在碱性条件下用特丁基甲醚提取，并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液（pH =3），使氯丙嗪被提取到缓冲溶液中，并用特丁基甲醚净化缓冲溶液，改变缓冲溶液为碱性，将氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，浓缩，定容。供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

前处理仪器：电子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；离心机（ZD转速为10000 r/min）；离心管（锥形底玻璃离心管15 mL和10 mL具塞；锥形底聚丙烯离心管50 mL具螺旋盖）；过滤器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龙膜0.2 μm×47 mm）；液体分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流动相过滤装置；氮气浓缩仪；高速涡流混合器；振荡器；食物调理机；一次性移液管；酸度计（测量精度为±0.02 unit）；超声波仪；一次性注射器（1 mL）；试样瓶（2.0 mL）。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备

猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织，猪肉要去皮和骨头。将其绞碎拌匀。分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。将试样置于-18 ℃条件下贮存。

前处理方法

1.提取

称取试样2.00 g（精确到0.01 g）放入50 mL聚丙烯离心管中，加入200 μL乙腈进行涡流混合，混合后加入400 μL 5 mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚，置于振荡器上高速振荡15 min，离心15 min（转速为4000 r/min）。吸出上清液，定量将特丁基甲醚转移到干净的15 mL玻璃离心管内，待净化。

2.净化

将上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=3）3 mL，振荡10 min，离心10 min（4000 r/min）。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振荡5 min，离心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚层，弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚，振荡15 min，离心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚转移到干净的10 mL离心管中。在40 ℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 μL流动相溶液，进行涡流混合，超声处理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。

国标解读

1.氯丙嗪标准物质用无水乙醇配成0.10 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃避光保存，有效期一年。

2.该国标通过改变提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和缓冲盐溶液之间转移，达到净化的目的。

3.移取特丁基甲醚的过程中，注意离心后轻拿轻放，保证液面分层清晰，准确取出全部有机层溶剂。

4.在氮气浓缩过程中注意控制温度不要超过40 ℃，气流在液面上方0.5 cm处缓缓吹出，随着液面下降调整气针高度，使有机溶剂吹至近干状态。

5.氮气浓缩定容后，先涡旋再超声，保证目标化合物充分溶解下来。

6.如果有条件，建议使用氯丙嗪同位素内标进行回收率的校正。

参考文献

GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定 液相色谱―串联质谱法

图1 猪肾和肌肉组织样品中氯丙嗪残留量测定的前处理流程图

氯丙嗪标准物质信息表

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猪肾和肌肉组织中氯丙嗪残留量测定的前处理方法

氯丙嗪的危害及检测目的 

氯丙嗪属于吩噻嗪类药物，可作用于中 枢神经系统，故被作为中 枢多巴胺受体的阻断剂，具有镇静、催眠、镇吐、抗晕眩等功效。当前，氯丙嗪常被一些养殖户违规添加至家畜饲料中，目的是通过YZ家畜运动来达到“短期育肥”的效果。或在家畜长途运输过程中减少其应激反应，进而降低死亡率。氯丙嗪药物的滥用造成其在动物体内大量残留，并通过食物链进入人体，长期蓄积会引发人体食物中毒、肝脏和肾脏病变等，直接危害人体健康。目前，欧盟明令规定“不得在动物源性食品中检出氯丙嗪”。我国也对氯丙嗪进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药ZD残留限量》中规定了氯丙嗪允许作ZL使用，但不得在动物性食品中检出。

本文阐述了如何将氯丙嗪从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 20763-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯丙嗪

——————应用范围：猪肾/肌肉组织——————

液相色谱-串联质谱法

方法原理：氯丙嗪在碱性条件下用特丁基甲醚提取，并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液（pH =3），使氯丙嗪被提取到缓冲溶液中，并用特丁基甲醚净化缓冲溶液，改变缓冲溶液为碱性，将氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，浓缩，定容。供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

前处理仪器：电子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；离心机（ZD转速为10000 r/min）；离心管（锥形底玻璃离心管15 mL和10 mL具塞；锥形底聚丙烯离心管50 mL具螺旋盖）；过滤器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龙膜0.2 μm×47 mm）；液体分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流动相过滤装置；氮气浓缩仪；高速涡流混合器；振荡器；食物调理机；一次性移液管；酸度计（测量精度为±0.02 unit）；超声波仪；一次性注射器（1 mL）；试样瓶（2.0 mL）。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备

猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织，猪肉要去皮和骨头。将其绞碎拌匀。分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。将试样置于-18 ℃条件下贮存。

前处理方法

1.提取

称取试样2.00 g（精确到0.01 g）放入50 mL聚丙烯离心管中，加入200 μL乙腈进行涡流混合，混合后加入400 μL 5 mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚，置于振荡器上高速振荡15 min，离心15 min（转速为4000 r/min）。吸出上清液，定量将特丁基甲醚转移到干净的15 mL玻璃离心管内，待净化。

2.净化

将上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=3）3 mL，振荡10 min，离心10 min（4000 r/min）。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振荡5 min，离心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚层，弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚，振荡15 min，离心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚转移到干净的10 mL离心管中。在40 ℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 μL流动相溶液，进行涡流混合，超声处理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。

国标解读

1.氯丙嗪标准物质用无水乙醇配成0.10 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃避光保存，有效期一年。

2.该国标通过改变提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和缓冲盐溶液之间转移，达到净化的目的。

3.移取特丁基甲醚的过程中，注意离心后轻拿轻放，保证液面分层清晰，准确取出全部有机层溶剂。

4.在氮气浓缩过程中注意控制温度不要超过40 ℃，气流在液面上方0.5 cm处缓缓吹出，随着液面下降调整气针高度，使有机溶剂吹至近干状态。

5.氮气浓缩定容后，先涡旋再超声，保证目标化合物充分溶解下来。

6.如果有条件，建议使用氯丙嗪同位素内标进行回收率的校正。

参考文献

GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定 液相色谱―串联质谱法

图1 猪肾和肌肉组织样品中氯丙嗪残留量测定的前处理流程图

氯丙嗪标准物质信息表

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氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于FZ球虫病。由于该药GX、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均质器（15000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL），比色管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

#样品的制备、保存与要求#

1.肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.提取

称取试样约5 g（精确到0.01 g ）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 1 %三lyu乙酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均质提取1 min，5000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中，残渣再用20 mL三lyu乙酸-乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2.净化

分取10 mL提取滤液，于45 ℃ 氮气吹至约3 mL，加入2 mL正己烷，涡旋振荡30 s，5000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，下层溶液以小于2 mL/min流速过HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗涤样品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脱并收集，洗脱液在45 ℃氮气吹干，用1.0 mL定容液（乙酸铵-乙腈溶液4+6）溶解，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱分析。

国标解读及注意事项

1.盐酸氨丙啉标准物质先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL的标准储备液。

2.本方法使用1 %三lyu乙酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。

3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5.本方法使用基质曲线进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图

氨丙啉信息表

伊维菌素的危害及检测目的

阿维菌素类药物（Avermectins，AVMs）由链霉菌的发酵产物中分离的大环内酯类抗生素，包括伊维菌素、多拉菌素、阿维菌素、爱普菌素等品种。阿维菌素类药物是目前兽医临床上应用最广泛的兽用驱虫药，被广泛应用于牛、羊等动物，其作用机理是干扰害虫神经生理活动，致使害虫出现麻痹而中毒死亡。阿维菌素类药物虽然作用剂量小，但其脂溶性较高，残留时间长，世界卫生组织将其列为高毒化合物。该类药物的不规范使用和食物链富集，易引发运动失调、呼吸缓慢、中 枢神经系统中毒等症状，甚至致人死亡，对人类健康造成严重威胁，所以应对动物性食品中阿维菌素类药物含量进行监测。我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留限量》中明确规定了伊维菌素、多拉菌素、阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将伊维菌素从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液相色谱-串联质谱仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 22953-2008，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素

应用范围：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗

GX液相色谱法

方法原理：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙腈提取后，正己烷脱脂，中性氧化铝柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；组织捣碎机；匀浆机（8000 r/min）；离心机（4000 r/min）；超声波水浴；液体混匀器；固相萃取装置；氮吹仪。 

检测仪器： HPLC-MS/MS+ESI源

试样的制备与保存

取样品约500 g用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记，于零下18 ℃冰箱中保存。制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。

前处理方法

1.提取

准确称取2 g组织样品（准确至0.01 g）至50 mL离心管中，加入8 mL乙腈，匀浆机上8000 r/min均质20 s，4000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL离心管中；另取一50 mL离心管加入8 mL乙腈，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30 s，4000 r/min离心5 min，上清液合并至50 mL离心管，离心管中的沉淀再加入6 mL乙腈，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30 s，4000 r/min离心5 min，上清液合并至50 mL离心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度，混匀备用。

2.净化

向上述装有样品提取液的50 mL离心管中加入10 mL乙腈饱和的正己烷脱脂，涡旋振荡1 min，4000 r/min离心5 min，弃去上层正己烷，重复此操作一次，下层乙腈溶液待用。

将中性氧化铝净化柱安置在固相萃取装置上，准确移取10.0 mL已脱脂的样品提取液至中性氧化铝净化柱中，控制流速在1 mL /min～2 mL /min，用2 mL×2乙腈淋洗净化柱，收集全部流出液，流出液转移至吹氮管中，50 ℃下氮气吹至干，用1.00 mL乙腈溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡10 min，0.2 μm滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用乙腈配成100 μg/mL的标准储备液，在零下18 ℃保存。

2.本方法通过乙腈提取，正己烷脱脂，中性氧化铝柱净化的方式进行目标化合物的提取净化。

3.本方法采用洗涤均质刀头，三次提取的方式，提高目标化合物的回收率。

4.氧化铝柱净化过程中除了活化溶液，其余溶液（上样液和淋洗液）都要收集。为保证净化效果，过柱时需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。可用商品化的中性氧化铝固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化铝净化柱。

5.由于该类化合物没有对应的同位素内标用于回收率的校正，所以本方法使用空白样品提取液配制基质标准工作液，进行定量。

参考文献

GB/T 22953-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

河豚鱼、鳗鱼中伊维菌素残留量测定的前处理流程图：

动物性食品中杆菌肽残留量测定的前处理方法

杆菌肽的危害及检测目的

杆菌肽是由一组类似的多肽成分组成的混合物，其中杆菌肽A、B1和B2组分被认为ZJ抗微生物活性。兽医临床上常见以杆菌肽锌和杆菌肽亚甲基水杨酸盐形式用于畜禽促生长和FZ动物的坏死性肠炎。在欧盟，亚甲基水杨酸杆菌肽还被推荐用于ZL由产气荚膜梭菌引起的兔坏死性肠炎。杆菌肽KJ谱广、吸收低，但会带来神经毒性和肾毒性，还会产生抗药性风险，是ZL中使用普通抗生素无效的ZH选择。若该类抗生素通过食物链进入人体，会对人体造成健康隐患。因此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了杆菌肽在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将杆菌肽从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 20743-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：杆菌肽

应用范围：猪肉、猪肝和猪肾

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中杆菌肽残留用酸化的甲醇水匀浆提取，经双硫腙三lv甲烷溶液进行液液分配净化后，再经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；高速组织捣碎机（10000 r/min）；振荡器；离心机（4000 r/min）；离心管（10 mL和60 mL具塞）；贮液器（50 mL）；固相萃取真空装置；氮吹仪；微量注射器（25 μL和100 μL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

猪肝脏、肾脏要去除脂肪和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和骨头，将其搅碎拌匀，分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。试样置于零下18 ℃条件下保存。

前处理方法

1.提取

称取10 g试样（精确到0.01 g ）置于60 mL离心管中，加入0.1 mL甲酸和20 mL甲醇+水（1+1），于高速组织捣碎机上匀浆提取1 min，然后加入20 mL经甲醇+水（1+1）饱和的0.0025 %双硫腙三lv甲烷溶液，于振荡器上剧烈振荡10 min，以4000 r/min离心10 min，取上清液10 mL于50 mL试管中，弃去其余上清液。

往上述双硫腙三lv甲烷溶液中加入30 mL水，捣碎残渣，置于振荡器上剧烈振荡10 min，移取全部上清液于另一60 mL离心管中。重复提取一次，合并上清液，混匀，以4000 r/min离心10 min，取上清液30 mL与50 mL试管中的提取液合并，混匀。

2.净化

在预处理过的固相萃取柱（HLB 60 mg/3 mL用3 mL甲醇和3 mL水活化）顶部连接贮液器，移入上述试管中样液，待样液全部通过萃取柱后，加入2 mL水，弃去全部流出液。然后，将固相萃取柱在50 kPa～55 kPa的负压下抽干1 h，ZH用2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL试管中，洗脱液在35 ℃水浴中用氮气吹干，用0.5 mL甲醇重新溶解残渣，再加入0.5 mL 0.3 %甲酸溶液，摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.杆菌肽标准物质用0.1 %甲酸甲醇溶液配成浓度为0.1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃保存，有效期3个月。

2.本方法使用酸化甲醇水均质提取，经双硫腙三lv甲烷液液分配净化后，再用HLB固相萃取柱净化，相当于5 g样品进行上机检测。

3.杆菌肽易溶于水，在弱酸性条件下稳定，有机相越高回收率越低，使用酸化甲醇水（1+1）提取回收率高但是容易乳化，使用双硫腙三lv甲烷进行液液分配净化，离心后可降低乳化程度，使上清液更加清澈。

4.通过两次水洗双硫腙三lv甲烷残渣，不仅可提高目标物的回收率，确保稀释倍数准确，还可以在合并上清液后降低甲醇比例，为下一步固相萃取净化做好准备。

5.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证净化富集的效果。

6.本方法使用基质标准工作溶液进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品提取液配制基质曲线。

参考文献

GB/T 20743-2006 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

图1 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量测定的前处理流程图

表1  杆菌肽信息表

动物性食品中氨丙啉残留量测定的前处理方法

氨丙啉的危害及检测目的

氨丙啉是一种抗球虫药，主要以盐酸盐形式存在，在世界范围内被广泛应用于FZ球虫病。由于该药GX、安全，不易引起球虫耐药性，在鸡、兔、犊牛、羔羊中均有应用。盐酸氨丙啉虽然毒性较低，但是由于不规范使用，抗球虫药长期、持续添加在饲料中，极容易造成药物在肉及蛋品中的残留现象，危害人体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了氨丙啉在动物靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将氨丙啉从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4583-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氨丙啉

应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪和牛奶

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的氯丙啉用1 %三氯yi酸-乙腈溶液（3+7）提取，经HLB固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均质器（15000 r/min）；离心机（5000 r/min）；涡旋振荡器；氮吹仪；具塞塑料离心管（50 mL），比色管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备、保存与要求

1.肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋、脂肪

取样品中又代表性的可食部分约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃ 冰箱内保存。

2.牛奶

从所取全部样品中取出有代表性样品500 mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 以下冷藏存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.提取

称取试样约5 g（精确到0.01 g ）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 1 %三氯yi酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均质提取1 min，5000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中，残渣再用20 mL三氯yi酸-乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混匀。提取液经滤纸过滤后待净化。

2.净化

分取10 mL提取滤液，于45 ℃ 氮气吹至约3 mL，加入2 mL正己烷，涡旋振荡30 s，5000 r/min离心5 min，弃去正己烷层，下层溶液以小于2 mL/min流速过HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗涤样品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脱并收集，洗脱液在45 ℃氮气吹干，用1.0 mL定容液（乙酸铵-乙腈溶液4+6）溶解，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱分析。

国标解读及注意事项

1.盐酸氨丙啉标准物质先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液浓度以氯丙啉计为100 μg/mL的标准储备液。

2.本方法使用1 %三氯yi酸-乙腈溶液提取目标化合物，正己烷除脂，HLB柱富集净化，稀释倍数=5，相当于1 g试料进行上机检测。

3.提取液先用氮吹方法浓缩，乙腈挥发后，剩余水相用正己烷除脂后，再过柱净化。

4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证富集的效果。

5.本方法使用基质曲线进行定量分析，根据具体检测样品选取合适的基质制作空白样品基质液。

参考文献

SN/T 4583-2016 出口动物源食品中氨丙啉残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 动物源性食品中氨丙啉残留量测定的前处理流程图

 表1  氨丙啉信息表

文章来源 坛墨质检（https://www.gbw-china.com/)

左旋咪唑的危害及检测目的

       左旋咪唑作为一种广谱型抗线虫药，药源丰富，被广泛应用于畜禽养殖企业，效果良好。但不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，研究表明，人体摄入过量左旋咪唑可引起畸变、癌变等症状，严重危害人类健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留限量》中明确规定了左旋咪唑在动物靶组织中的残留限量，并且规定泌乳期和产蛋期禁用。

       本文阐述了如何将左旋咪唑从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成高/效液相色谱仪可以检测的形式。以提取、净化为重/点，依据国标GB 29681-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：左旋咪唑

应用范围：牛奶

GX液相色谱法

方法原理：试料中残留的左旋咪唑，用碳酸盐缓冲液和乙酸乙酯溶液提取，C18柱净化，甲醇洗脱，GX液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；均质机；冷冻高速离心机；电热恒温水浴锅；旋涡混合器；茄形瓶（50 mL）；离心管；滤膜（0.45 μm）。

检测仪器： HPLC-PDA 

试样的制备与保存

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料；

取均质后的空白样品，作为空白试料；

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试料5 g± 0.05 g，于离心管中，加碳酸盐缓冲液5 mL，加乙酸乙酯10 mL，混匀，6000 r/min离心10 min，取上清液于茄形瓶中，再加乙酸乙酯10 mL萃取一次，合并两次上清液，于50 ℃水浴旋转蒸发至干，加碳酸盐缓冲液5 mL溶解残余物，备用。

2.净化

C18柱（3 mL/500 mg）依次用水3 mL、甲醇3 mL和碳酸盐缓冲液3 mL活化，取备用液过柱，用水3 mL淋洗，用甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液，于50 ℃水浴氮气吹干，用流动相1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供GX液相色谱测定。

国标解读及注意事项

1.左旋咪唑用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃保存，可使用3个月。

2.本方法使用碳酸盐缓冲液提取，乙酸乙酯萃取，C18固相萃取柱净化的方式进行目标化合物的提取净化。

3.本方法采用两次萃取的方式，提高目标化合物的回收率。

4.为保证固相萃取净化效果，过柱时需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。水淋洗后完全抽干小柱，再进行洗脱。

5.左旋咪唑也可以使用液质联用仪进行检测，同时添加相对应的盐酸盐同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献

GB 29681-2013 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 GX液相色谱法

动物性食品中卡拉洛尔残留量测定的前处理方法

卡拉洛尔的危害及检测目的

卡拉洛尔又名咔唑心安，化学名4- (3-异丙胺基-2-羟丙氧基) 咔唑，属β肾上腺受体阻断剂，在兽医临床中常用于消除动物紧张，特别是在运输过程中防止因应激导致的动物死亡。β肾上腺受体阻断剂目前已成为临床上常见的七类兽药残留之一，其代表性药物卡拉洛尔常在动物屠宰前数小时内注射使用，因此相对其他兽药可能对消费者造成的健康风险更高。因此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了卡拉洛尔在猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将卡拉洛尔从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据行标SN/T 4144-2015，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：卡拉洛尔

应用范围：猪肉、鱼肉、虾肉、肝脏、肾脏、脂肪、奶、鸡蛋和蜂蜜

GX液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的卡拉洛尔用甲醇（脂肪用乙酸乙酯-正己烷溶解提取）提取，提取液经MCX柱净化（脂肪用GPC净化）后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法峰面积定量。

前处理仪器：

凝胶净化色谱仪；电子天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；组织捣碎机；涡旋混匀器；氮吹仪；均质机（10000 r/min）；离心机（6000 r/min）；具塞塑料离心管（50 mL）。

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

样品的制备与保存

1.肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、脂肪和水产品（鱼肉、虾肉）：取代表性样品约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下18 ℃下保存。

2.奶、蜂蜜、鸡蛋：取代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于4 ℃下保存。

前处理方法

1.提取

肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、鱼肉、虾肉

称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL甲醇，涡旋提取2 min，用均质器（10000 r/min）均质2 min，5500 r/min离心3 min，将有机相转移至50 mL容量瓶中，残渣再用15 mL甲醇均质提取一次。离心合并有机相，用水定容至50 mL，待净化。

奶、蜂蜜、鸡蛋

称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL甲醇，涡旋提取2 min，5500 r/min离心3 min，将有机相转移至50 mL容量瓶中，残渣再用15 mL甲醇涡旋提取一次。离心合并有机相，用水定容至50 mL，待净化。

脂肪

称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入20 mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解并混匀，5500 r/min离心3 min，将有机相转移至50 mL容量瓶中，残渣再用20 mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解提取一次。离心合并有机相，用乙酸乙酯-环己烷（1+1）定容至50 mL，待净化。

2.净化

肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、鱼肉、虾肉、奶、蜂蜜、鸡蛋

MCX柱（60 mg/3 mL）依次用甲醇3 mL和水3 mL活化，加入5.0 mL待净化液，用3 mL水淋洗，用抽空3 min。用5 mL 5 %三乙胺-甲醇洗脱，收集洗脱液，于40 ℃氮气浓缩吹干，残渣用50 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈饱和正己烷脱脂，下层清液过0.45 μm滤膜，供液质测定。

脂肪

凝胶渗透色谱条件

凝胶色谱净化系统：Accuprep（J2）；

凝胶净化柱：Bio-Beads S-X3（38 μm～75 μm），400 mm×25 mm（内径）；

流动相：乙酸乙酯-环己烷（1+1）；

流速：5 mL/min；

收集时间：7 min~17 min。

净化过程：

取10 mL待净化液于GPC样品管中，用GPC柱净化，收集洗脱液，于40 ℃旋转蒸发至干，残渣用50 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈饱和正己烷脱脂，下层清液过0.45 μm滤膜，供液质测定。

国标解读及注意事项

1.卡拉洛尔标准物质用乙腈配成100 μg/mL的标准储备液，在0 ℃～4 ℃ 避光保存。

2.本方法使用甲醇提取两次目标化合物，阳离子交换柱富集净化，相当于0.5 g试料进行上机检测（其中脂肪样品用乙酸乙酯-正己烷提取两次，再用GPC柱净化，相当于0.4 g试料进行上机检测）。

3.MCX固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。

洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。

4.在GPC净化过程中配合紫外检测器使用，可以准确监测目标化合物及杂质的流出情况。

参考文献

SN/T 4144-2015 出口动物源性食品中卡拉洛尔残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

图1 肌肉、内脏和水产中卡拉洛尔残留量测定的前处理流程图

 图2 奶、蜂蜜和鸡蛋中卡拉洛尔残留量测定的前处理流程图

图3 脂肪中卡拉洛尔残留量测定的前处理流程图

文章来源：标准物质ZX（https://www.gbw-china.com/)