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- 子沫· 2010-12-05 00:00:00
- 糖尿病时的代谢紊乱就是指在糖代谢紊乱的同时还伴有脂代谢水电解质维生素等代谢的紊乱，导致人体代谢功能异常，在脏器受损的同时有大量的毒性物质产生，如果不及时纠正，损害就会进一步加大，Z终影响生命。而在纠正代谢紊乱的ZL方法中只有胰岛素的早期合理应用才是Z具有确切LX的，口服西药基本无纠正代谢紊乱的作用，这也就是近些年来临床使用胰岛素几率增加的原因之一。
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- 山口的人 2010-12-01 00:00:00
- 高血糖是糖尿病的主要症状，通常认为糖尿病是一种葡萄糖代谢紊乱的疾病。胰岛素是碳水化合物、脂类和蛋白质代谢的关键性调节因素，糖尿病患者胰岛素的相对或缺乏影响许多代谢过程，胰岛素缺乏的程度、并发症的存在影响代谢紊乱的程度。那些比较严重的并发症(如感染、心肌梗死等)能引起应激反应，应激反应使体内与胰岛素有相反作用的激素(counter—regulatory hormones，反向调节激素)的水平升高而加重糖尿病的代谢异常。糖尿病时代谢紊乱的严重程度随病情而异，可为胰岛素相对缺乏时表现为2型糖尿病患者的轻度高血糖，或严重胰岛素缺乏时表现为1型糖尿病患者的酮症酸中毒。对糖尿病患者进行ZL，其血糖水平虽可降至正常或接近正常水平，但体内的许多代谢过程仍可异常。
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- 黄山ru 2016-12-01 00:00:00
- 糖尿病时的代谢紊乱 高血糖是糖尿病的主要症状，通常认为糖尿病是一种葡萄糖代谢紊乱的疾病。胰岛素是碳水化合物、脂类和蛋白质代谢的关键性调节因素，糖尿病患者胰岛素的相对或缺乏影响许多代谢过程，胰岛素缺乏的程度、并发症的存在影响代谢紊乱的程度。那些比较严重的并发症(如感染、心肌梗死等)能引起应激反应，应激反应使体内与胰岛素有相反作用的激素(counter—regulatory hormones，反向调节激素)的水平升高而加重糖尿病的代谢异常。糖尿病时代谢紊乱的严重程度随病情而异，可为胰岛素相对缺乏时表现为2型糖尿病患者的轻度高血糖，或严重胰岛素缺乏时表现为1型糖尿病患者的酮症酸中毒。对糖尿病患者进行ZL，其血糖水平虽可降至正常或接近正常水平，但体内的许多代谢过程仍可异常。 一、胰岛素的正常分泌及其对代谢的作用 (一)胰岛素的正常分泌 高血糖是糖尿病的标志。高血糖是由于胰岛素的相对或缺乏导致葡萄糖以异常的高速率进入循环血液或(和)葡萄糖从循环中清除速率降低所引起。 胰岛素由的胰岛B细胞合成和分泌。正常时，灌注血液的葡萄糖浓度是调节B细胞分泌胰岛素的Z重要的因素j当血糖升高时，胰岛素的分泌量可达基础水平的10---20倍；当糖负荷后血糖下降至正常水平时，胰岛素的分泌也迅速回复至基础水平。在持续高血糖的刺激下，胰岛B细胞的反应呈双相性。在起初为快速分泌相，即diyi时相，反映B细胞贮存颗粒中胰岛素的分泌，在血糖升高后3--．5 min达峰值，胰岛素分泌量 可增加10倍，5～10 rain后胰岛素分泌量下降50％。在血糖升高约15 min后，出现胰岛素分泌的第二次增多，称之为延缓分泌相，即第二时相，在第2～3 h达高峰并持续较长的时间，分泌速率也远大于diyi时相，此时相反映了激活B细胞内胰岛素新合成和释放过程。口服葡萄糖对胰岛素分泌的刺激作用明显强于同剂量葡萄糖静脉注射的刺激，口服葡萄糖除引起血糖升高和迷走神经刺激外，葡萄糖还刺激胃肠黏膜释放多种胃肠激素如胰升糖素样肽-1（GLP-1)、抑胃肽(GIP)等，可加强高血糖刺激胰岛素的分泌。许多氨基酸(给予混合氨基酸或蛋白质餐后)有刺激胰岛素分泌的作用，其中以精氨酸和赖氨酸的作用Z强，但是在血糖正常时给予氨基酸只能使胰岛素的分泌少量增加，如果在血糖升高时有较高的氨基酸水平存在，可使高血糖引起的胰岛素分泌成倍增加。血中脂肪酸和酮体水平显著升高时也可促进胰岛素分泌。 正常人每日约分泌50 u胰岛素。在两餐间、过夜空腹或24 h禁食时，胰岛素有微量的基础分泌，每小时0．5～1 u。正常成人空腹血浆胰岛素的浓度为5～20 mu／L，进餐后8～10 min外周血浆胰岛素浓度开始升高，30～45min到达高峰，随后逐渐下降， 90--120min回复至基础水平。 (二)胰岛素对代谢的作用 胰岛素主要作用于肝脏、肌肉和脂肪组织，调节糖、蛋白质和脂类的代谢和贮存。胰岛素有多种代谢效应，在肝脏促进糖原合成和脂肪酸合成，YZ糖原分解、糖异生和酮体生成；在脂肪组织中则促进甘油合成、脂肪酸合成、三酰甘油合成和胆固醇合成，YZ脂肪分解；在肌肉组织中促进精原合成、氮基酸摄取和蛋白质合成，YZ蛋白质分解代谢。因而胰岛素是一种多方面促进合成代谢的激素。 1．胰岛索对糖代谢的作用 口服葡萄糖75 g后的3 h期间，在胰岛素的作用下，肝脏是处理葡萄糖的Z重要的组织，由肠道吸收葡萄糖的60％在肝内被用于合成糖原和三酰甘油。在人类，肝脏在葡萄糖转化为脂肪过程中的作用比脂肪组织更为重要。由肠道吸收葡萄糖的20％--25％为脑和红细胞所利用，脑和红细胞为非胰岛素依赖组织。在胰岛素的作用下，肌肉和脂肪组织处理15％左右吸收的葡萄糖。正常人餐后24 h内血糖波动范围较小，血糖水平波动的上限一般不超过7.8 mmoL／L。血糖水平的调节与血糖水平的稳定性主要取决于肝脏对小量胰岛素分泌的敏感性。在对葡萄糖负荷的处理上由于肌肉和脂肪组织对胰岛素水平轻度升高较不敏感，因而不像肝脏那样重要，但在高胰岛素血症情况下，肌肉和脂肪组织在处理葡萄糖负荷上所起的作用也有助于减轻血糖水平的波动。在摄食葡萄糖或餐后，血浆胰岛素水平的升高不仅促进肝脏摄取葡萄糖和合成糖原贮存，也YZ肝脏摄取糖异生的前体(如丙氨酸，乳酸，丙酮酸，甘油)而YZ葡萄糖异生。 胰岛素对糖代谢有多方面的影响，首先是YZ肝脏的葡萄糖输出，这是通过YZ肝糖。原分解和YZ糖异生而达到的，其次是刺激外周组织摄取葡萄糖。在外周血胰岛素相对较低的水平时就能YZ肝脏葡萄糖输出，在正常人其半数Z大YZ水平为30 mu／L左右。胰岛素通过骨骼肌和脂肪细胞膜的葡萄糖转运蛋白(glucose transportor)并激活细胞内有关代谢酶(如糖原合成酶等)来刺激这些组织摄取葡萄糖，但要求较高的外周血胰岛素水平，在正常人胰岛素刺激这些组织摄取葡萄糖的半数Z大刺激作用的外周血水平是约100 mu／L。胰岛素也刺激这些组织氧化葡萄糖，在正常人胰岛素刺激这些组织氧化葡萄糖的半数Z大刺激作用的外周血水平为50 mu／L左右。 2．胰岛素对脂类代谢的作用 胰岛素刺激脂蛋白酯酶，加速血液循环中内、外源性三酰甘油的清除。胰岛素也YZ脂肪细胞中对胰岛素敏感的酯酶活性，YZ三酰甘油的水解和游离脂肪酸的释放。胰岛素抗脂肪分解所需的水平比刺激摄取葡萄糖所需的水平要低得多，在正常人胰岛素半数Z大抗脂肪分解作用的外周血水平为10 mu／L左右。在脂肪细胞通过胰岛素作用摄取的葡萄糖大部分用于形成3-磷酸甘油，小部分用于合成脂肪酸，两者形成三酰甘油。但通过胰岛素作用合成脂肪的主要部位是在肝脏。胰岛素一方面抗脂肪分解，另一方面促进脂肪合成，可导致机体脂肪贮存量增加。 胰岛素对酮体生成有显著的YZ作用，这主要通过其强烈的抗脂肪分解作用和刺激脂肪酸合成，并在肝细胞线粒体肉毒碱水平YZ脂肪酸氧化来达到的。合成脂肪酸所需j的乙酰CoA主要来自葡萄糖，葡萄糖分解成丙酮酸后进入线粒体，丙酮酸在丙酮酸脱氢酶复合体催化下氧化脱羧形成乙酰CoA，在线粒体内乙酰CoA与草酰乙酸缩合成柠檬酸．柠檬酸通过线粒体内膜的特异性载体进入胞质，再在胞液中裂解释放出乙酰CoA，胞液中的乙酰CoA在乙酰CoA羧化酶的作用下羧化成丙二酰CoA后在内质网上碳链纰续延长合成脂肪酸。胰岛素刺激肝细胞脂肪酸合成，合成脂肪酸的diyi个中间产物丙二酰CoA对肉毒碱脂酰转移酶有YZ作用。肉毒碱穿梭系统是脂肪酸氧化所必需的．脂肪酸在内质网和线粒体外膜上活化成脂肪酰CoA后不能直接进入线粒体，必需在肉毒碱的参与下在线粒体内膜两侧的肉毒碱脂酰转移酶I和Ⅱ的作用下进入线粒体内进一步氧化。胰岛素在刺激肝细胞合成脂肪酸的同时，YZ了脂肪酸的氧化。脂肪酸氧化时形成的大量乙酰CoA是进一步形成酮体所必需的中间代谢产物，胰岛索通过YZ脂肪酸氧化而降低了肝脏酮体的产量。肝细胞缺乏活化酮体的酶而不能利用自身产生的酮体，只能释放入血液循环，为肝外组织(心肌、骨骼肌、脑、肾等)氧化和供能。正常时血液中仅有微量浓度的酮体，浓度低于0.5 mmol／L。在胰岛素缺乏时这种YZ作用减弱，或饥饿时月旨肪动员和分解代谢增加等情况下，肝脏酮体产量增加超过肝外组织氧化利用酮体的能力时，血液中酮体浓度异常升高。由于酮体成分中的乙酰乙酸和13羟丁酸为酸性中间代谢产物，可引起酮症酸中毒。 3．胰岛素对蛋白质代谢的作用 正常人在蛋白质餐(如瘦肉)后从肠道吸收的氨基酸经门静脉流过肝脏时，非支链氨基酸被肝脏摄取和利用，支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)几乎未被肝脏摄取和代谢而进入体循环，使循环血液中支链氨基酸浓度从基态一倍或更多，血液中的支链氨基酸可占总氨基酸的609／6。蛋白质餐后血液胰岛素水平升高使肌肉摄取氨基酸增加，特别是摄取支链氨基酸增加。肌肉摄取的支链氨基酸中小部分用于合成肌肉的结构成分，大部分被分解和氧化。在肌肉蛋白质净合成的同时，仍向血液不断释放出一定数量的丙氨酸和谷氨酰胺。丙氨酸可被肝脏用于糖异生，而谷氨酰胺为小肠和肾脏摄取、氧化，或形成丙氨酸再被肝脏用于糖异生。 在空腹或饥饿时肌肉蛋白质分解释出氨基酸，但肌肉不按蛋白质的氨基酸组成比例向血液释放各种氨基酸，而是丙氨酸占309／6左右，谷氨酰胺占200，4左右。在肌肉中大多数氨基酸(生糖氨基酸)可通过转氨基作用形成酮酸，再经一系列代谢形成丙酮酸而释放入血液，再被肝脏用于糖异生；少数氨基酸(生酮氨基酸)可形成酮体。肝脏中蛋白质分解代谢形成的支链氨基酸，肝脏不能把他们作为糖异生的原料应用，需经血液运输到肌肉被利用。 增强蛋白质合成和YZ蛋白质分解的血液胰岛素水平是介于YZ脂肪分解的血液胰岛素水平和YZ肝葡萄糖输出的血液胰岛素水平之间。胰岛素缺乏时，蛋白质分解代谢加强，生成较多的丙酮酸，使肝脏糖异生增加和肝脏葡萄糖输出增加，是高血糖症的原因之一。
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健康
肥胖、糖尿病、心血管疾病以及其他代谢综合征范畴内的相关疾病，是关系到我们健康Z紧迫的问题，其中代谢相关的激素由内分泌系统的各个器官，包括脂肪细胞、胰 腺和胃肠道分泌。在调节能量、食物摄取量和全身代谢方面发挥着重要作用。
近些年，随着II型糖尿病的发病率上升，代谢类疾病甚至已经影响到儿童和青少年人群。所以加快代谢综合征相关的激素研究，对代谢类疾病的ZL和预防都至关重要。
因为维持系统的平衡状态需要多个信号分子，所以没有一个生物标志物足以定义一个系统。另一方面，基于传统的检测手段，由于样本容量的限制，一次测量多个分析物是难以完成的。
图1：各种器官向大脑分泌的多种信号有助于维持食物摄入和能量消耗之间的平衡，调节体重和新陈代谢
为了克服这些挑战，基于Luminex®xMAP®磁珠技术的MILLIPLEX®MAP多因子检测试剂盒，可以实现同时定量代谢相关分析1。MILLIPLEX®代谢激素检测试剂盒的主要优势是包含：总GLP-1的检测和活性GLP-1的高灵敏度检测。
·胰岛激素 amylin (active or total)， C-peptide, glucagon, insulin 与pancreatic polypeptide (PP)
·胃肠激素 active ghrelin, gastric inhibitory peptide (GIP), glucagon-like peptide 1 (GLP-1, active or total), 与 peptide YY (PYY)
·脂肪因子 leptin, IL-6, monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), 与 tumor necrosis factor(TNF )
除了评估整个试剂盒的准确性和精密度外，我们还比较了MILLIPLEX®活性GLP-1高灵敏度试剂盒与默克金标准高灵敏度活性GLP-1的ELISA法试剂盒，得到的检测结果一致（货号：EZGLPHS-35K）。
1 材料和方法
实验检测使用：MILLIPLEX®人类代谢激素检测试剂盒(货号：HMHEMAG-34K)，实验按照试剂盒说明书进行操作。
为了确定代谢激素水平与食物摄入量的关系，我们采集了正常受试者(n=20)在禁食一晚或标准早餐后一小时的血液样本。在采集的血样中立即加入蛋白酶YZ剂(DPPIVYZ剂、AEBSF、蛋白酶YZ剂)。根据检测方案，使用MILLIPLEX®人代谢激素试剂盒，对血清和血浆样品进行分别进行检测。
同时，针对同一份样本使用默克公司高灵敏度GLP-1 ELISA试剂盒(货号：EZGLPHS-35K)进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
2 结 果
使用血清基质中连续稀释的每种分析物的标准，制备标准曲线，以测定相对于分析物浓度的测定反应(以平均荧光强度[MFI]测量)(图2B)。
标准曲线为所有因子设定用于检测的线性度超过3~5个数量级（图2A），试剂盒内所有因子未见交叉反应(数据未展示)。根据检测数据显示，MILLIPLEX®回收率达94%~107%，精度好(小于10%的板内变异系数[CV]和15-20%的板间变异系数(图2A)。
图2A
图2B:验证数据(2A)和标准曲线(2B)使用血清基质稀释，并使用MILLIPLEX®MAP 人类代谢激素试剂盒（Cat. No. HMHEMAG-34K）
接下来，我们评估了MILLIPLEX®试剂盒检测生物样品的性能。
正如之前的预期，多种代谢激素水平会随着食物的摄入而发生变化(血清中C-Peptide, GIP, active GLP-1与Insulin水平升高，如图3A所示)。将匹配的人血清和血浆样本进行比较，发现大多数分析物的血清和血浆样本浓度非常接近(数据如图3B所示)。
图3：使用MILLIPLEX®多因子试剂盒检测人类空腹或餐后受试者血清(样本中已加蛋白酶YZ剂)和血浆中的代谢激素。血清C-Peptide, GIP, active GLP-1和Insulin (3A)均有预期升高。从相关曲线(3B)中的斜率和R值可以看出，血清分析物水平与血浆分析物水平比较具有良好的相关性
我们分别使用MILLIPLEX®人类代谢激素检测试剂盒与目前已证实稳定的默克高敏活性GLP-1 ELISA试剂盒同时进行检测，并比较了活性GLP-1的定量检测结果（图4）：
● 使用GLP-1重组蛋白，按照一定比例进行梯度稀释建立标准曲线，Z终显示出几乎一致的反应结果数据和分析的线性范围(图4A)；
● 使用MILLIPLEX®多因子技术与ELISA技术分别检测生物样品中GLP-1的表达水平，并进行比较后(图4B)，显示这两种方法检测结果具有很好的相关性。
图4：MILLIPLEX® GLP-1(活性)检测结果与GLP-1(活性)ELISA检测结果(4A)的相关性，血清样本(4B)和空腹与餐后受试者的比较(4C和4D)
3 讨 论
通过以上的实验结果，MILLIPLEX®人类代谢激素检测试剂盒与其他商业上可用的多重检测试剂盒进行比较，该试剂盒操作更加友好、结果更加准确，检测性能与其他供应商的试剂盒相似或更好。该代谢相关激素检测试剂盒，在代谢疾病和其他相关病理生理学领域的基础研究和临床研究中，有潜力成为一个非常有用的工具。
代谢研究相关MILLIPLEX®试剂盒
参考文献
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