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  儿童婊沾 2011-05-18 00:00:00

  买基因组提取试剂盒就可以啊，网址http://www.sirna.cn/?bdclkid=WJD_Jairs45vCwnJfuwz8NVFGYKK0gscKpdZXNYdbJRP。

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  _无人懂他_ 2011-05-12 00:00:00

  对不起，无此网络资源。。。

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  元亨利贞8706 2011-05-12 00:00:00

  【实验目的】 1.学习并掌握细菌基因组的提取方法 【实验原理】 DNA是一个环形的大分子DNA，真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内。不同种属的生物，以及不同形式的细胞（如菌类、培养细胞、植物组织，动物组织）基因组提取的方法是不同的，但其基本原则是类似的，即既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。Z后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。 【实验材料】 大肠杆菌DH5α菌液 【实验试剂】 LB液体培养基，TE溶液，10%SDS，蛋白酶K，5mol/L NaCl， CTAB/NaCl溶液，酚/氯仿/异戊醇，异丙醇，70%乙醇 【实验仪器与用具】 微量移液器，低温离心机，水浴锅，eppendorf管，恒温摇床 【实验步骤】 （1）将2mL培养至对数期的大肠杆菌DH5α菌液5000rpm冷冻离心10min弃上清； （2）加190μL TE悬浮沉淀，并加10μL 10%SDS，1μL 20mg/mL蛋白酶K，混匀，37℃保温1h； （3）加30μL 5mol/L NaCl，混匀； （4）加30μL CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20min； （5）加入300μL酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，5000rpm离心10min，将上清液移至干净离心管； （6）加入300μL氯仿/异戊醇（24：1）抽提，取上清液移至干净管中； （7）加300μL异丙醇，颠倒混合，室温下静止10min，沉淀DNA； （8）5000rpm离心10min，沉淀DNA，加入500μL70%乙醇，5000rpm离心10min，弃乙醇，吸干； （9）溶解于20μLTE，取3μL 用于琼脂糖凝胶电泳验证，其余-20℃保存。

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