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- w630371263 2013-08-26 00:00:00
- 去哪里找Z出色的生命科学学术交流论坛？>>> 用台盼蓝拒染法计数活细胞: 1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中. 2. 台盼蓝染色有两种方法。一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。 例如：1/40稀释样本 加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。 3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。 4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。 5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。 6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。 7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。不要过满或不足。 8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。分别死细胞和活细胞。死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。 9. 活细胞计数按以下方法计算： 每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL 10.活细胞百分比计算方法如下：
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细胞迁移，指的是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。移动过程中，细胞不断重复着向前方伸出突触/伪足，然后牵拉后方胞体的循环过程。细胞骨架和其结合蛋白，还有细胞间质是这个过程的物质基础，另外还有多种物质会对之进行精密调节。细胞的运动有很多种，有生理性运动，如发育过程中的细胞运动，生殖细胞、干细胞的成熟过程中的位置变化。也有病理性变化，如肿瘤的迁移和侵袭。
从癌症的产生到转移，血管供给以及分裂增殖都一直是医学和生物学研究的热点。癌症细胞增殖失控，短时间内可以繁殖出大量后代，这样首先会造成生长空间的局促和养分，如氧气的紧张。这样恶性肿瘤内会形成一片坏死区，正如上面在组织损伤里面提到的，机体会尝试“修复”这些损伤。坏死组织会释放出一系列促血管生成因子，如血管内皮生长因子以及各种免疫细胞，如巨噬细胞。巨噬细胞也会释放大量促血管生成细胞因子和生长因子。因此肿瘤的研究伴随着复杂的细胞运动，如肿瘤细胞沿着循环系统的运动，血管内皮细胞和免疫细胞进入肿瘤实体的运动。
划痕法是经典的细胞行为学检测方法。在平铺的细胞单层上划出一条痕迹，然后清洗更换培养液后，细胞会从原有位置向划痕处迁移。统计划痕宽度和面积的变化就可以监控细胞迁移的速度和细胞迁移的能力。
以前在做划痕实验的时候受到诸多限制：首先微孔板的孔不能太小，孔越小，枪头越难伸进去；其次划出的痕迹边缘歪斜，无法形成一条直线；孔与孔之间的划痕宽度也不均一。这给划痕这个时间梯度的实验带来了很大的困扰。在多次的拍照过程中，由于划痕宽度的差异性对于划痕拍照位置的复位要求甚高。然而随着细胞迁移的发生，细胞的原位的形态和分布也发生的动态变化。所以复位划痕的拍照位置成为就成为了一个力气活：既然无法准确找到，那就全部拍下；既然每个位置宽度不一，那就全部统计。
借助MuviCyte™长时间活细胞成像系统的划痕套装。轻轻一划，解决全部困扰。
借助Scratcher整齐的96针，可以在96孔微孔板底面整齐的划出宽度均一的划痕。
借助MuviCyte™长时间活细胞成像系统可以盯住一个视野不停的拍。然后生成无抖动的视频。
借助专业的划痕分析软件，对划痕宽度、面积、愈合速度进行分析，可以获取的参数包括：
划痕面积
划痕的覆盖度
划痕的宽度
划痕的愈合速度
相对划痕密度
对于原始细胞区域、原始划痕区域、划痕分界线、迁移后细胞的区域进行jing准的划分，保证分析结果的精确。轻松的完成整个实验，再也不用熬夜拍划痕了。
MuviCyte™已于2020年1月1日全新上线，借助它的多荧光通道和多种物镜选择，可以完成多种复杂的复杂细胞模型的拍摄和观察，在肿瘤免疫、干细胞等多个领域都有重要的应用。
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