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氨基酸的定性鉴定原理

zjkac2010 2017-11-24 01:42:17 833  浏览
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  • qdfine 2017-11-25 00:00:00
      实验原理:  纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。  纸层析法又称纸色谱法,是用滤纸为支持物,所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成,滤纸纤维与水的亲和力强,与有机溶剂的亲和力弱,因此在展层时,纸纤维上吸附的水分是固定相,有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的,称上行法;由上向下移动的,称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点),进行展层,样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。  由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来,形成距原点距离不等的层析点。   引申:  氨基酸的定性鉴别:紫外吸收光谱法   精密称取酪氨酸、色氨酸、苯内氨酸各适量,分别用水制成1ml含20μg(色氨酸)、40μg(酪氨酸)、200μg(苯丙氨酸),在波长230~300nm测定各氨基酸的吸收光谱。 在20种天然氨基酸中,只有酪氨酸、色氨酸和苯内氨酸,在紫外区Z大吸收,酪氨酸的Z大吸收峰的波长275nm处,色氨酸的Z大吸收峰在波长280nm处,同时在波长288nm处有一个肩峰,苯丙氨酸Z大的吸收峰在波长258nm处,同时在257nm和264nm处有两个较小的吸收峰。由此可见,这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。

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