细胞培养箱

细胞培养箱是提供稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。那么如今，为什么大多数细胞培养需要二氧化碳细胞培养箱呢，下面就让小编为你一一说明。

通常，细胞培养液的ph值在7.0到7.4之间。大多数培养液通过碳酸盐pH缓冲系统来维持ph的稳定，因为它是人体血液中Z重要的pH缓冲系统，是一种生理pH缓冲系统。配置培养液时，经常需要往培养液里加入一定量的碳酸氢钠。

为了保持ph稳定，对于以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液，通过将培养箱中的二氧化碳的比例保持在2-10%之间，来维持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。为了便于气体的交换，那么一定程度的透气对于细胞培养的器皿是十分有必要的。那么如果采用了其他的pH缓冲系统，还需要二氧化碳细胞培养箱吗，答案是肯定的，当然需要。空气当中的二氧化碳浓度很低，培养液中的HCO3-会被很快耗尽，缓冲系统将失去效果，如果不再二氧化碳培养箱中培养，那么细胞难以正常生长，二氧化碳培养箱对于很多动物细胞的培养非常的有必要。

为了增加pH的缓冲能力，细胞培养液中常附加其他的pH缓冲系统，例如HEPES缓冲系统，当ph在7.2-7.4之间时，HEPES的缓冲能力非常强。当培养器皿被取出到二氧化碳培养箱外面，空气当中的二氧化碳浓度很低，培养液中的HCO3-会被很快耗尽，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果。但是这个时候pH依然仍够保持稳定，因为HEPES缓冲系统会起缓冲作用。

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细胞培养箱是提供稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。细胞培养时，细胞可能会出现死亡的现象，那么就让小编带你了解一下细胞培养时应该注意哪些问题，以确保细胞在培养箱内健康的成长。

1.保证实验材料无菌

由于细胞培养箱内温暖潮湿，是真菌生长的良好环境，所以必须定期的对细胞培养箱进行清洁。除此之外，应该先用酒精擦拭干净培养瓶，移液管和其他相关的物品后，再将它们放入到超净台，防止污染。

2.处理培养物时要小心

温度不断的波动或者剧烈的摇晃都会严重影响细胞的生长。所以培养箱Z好要温度恒定，不晃动，放在离电动仪器较远的地方。除此之外，一次处理多个细胞系可能会对细胞的表型和基因型产生影响，所以应该尽量避免。为了确定细胞系的身份，还需要定期完成STR图谱的分析。

3.正确解冻细胞

虽然解冻的操作步骤很简单，还是需要恰当的操作，防止细胞受到伤害。细胞不能够长时间暴露在高温的条件下。所以为了防止对DMSO直接造成伤害，应该先把冻存管放在37度的水浴中两分钟，然后再用条件培养基稀释。

4.使用对数生长期的细胞

细胞的培养过程总共分为停滞期，对数期和平台期三个阶段，这三个阶段分别代表了低细胞生长，高细胞生长和无细胞生长。细胞越有活力，细胞就越健康，分裂也就越快，在对数期以百分之七十到八十的汇合度存在。

5.传代前，不能让细胞完全汇合

贴壁细胞所占培养瓶表面积的百分比被称为汇合度。完全汇合表面贴壁细胞百分bai的占据了培养瓶的表面。如果细胞呈现完全汇合状态，那么就表面细胞不能够生长。所以要使用有活力的细胞。

6.选择良好的培养基

在细胞培养过程中，培养基影响着产品的质量，产量和成本。为了更好的实验结果，需要对每一种培养物进行培养基定制。

7.配置干粉培养基时要注意水的质量

比起干粉培养，液体培养常常会获得质量更高的结果。这或许与水的质量有关。

8.利用细胞代谢特性优化培养基

对使用过的培养基进行分析，对于鉴定必要成分（包括氨基酸和维生素）的代谢速率很有帮助。

9.避免细胞过度消化

为了实现贴壁细胞的传代，需要通过胰蛋白酶消化使细胞和容器结合的蛋白质。但是，细胞不能在胰蛋白酶中太长时间，否则胰蛋白酶会消化细胞表面的蛋白。

10.培养基不能持续使用抗生素

细胞培养物不能长时间在抗生素中，否则会出现对抗生素有着天然耐药性的菌株出现，潜在的污染可能会被掩盖在这种现象里。

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• 细胞培养箱的作用

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。下面就让小编来介绍一下细胞培养时细胞箱的操作规则。

培养箱使用规则：

1）在培养箱之前，必须用酒精对手套进行消毒CJ。

2）取细胞动作要快，取完要立即关上培养箱门，如无必要，尽量不要反复开关培养箱门。

3）牢记放细胞的位置，不要不经允许就擅自动别人的细胞。

4）时常检查CO2钢瓶中气体的使用情况。

5）检查培养箱中无菌水的情况，如果无菌水不足，应该及时添加。

6)每隔1月就需用酒精对培养箱箱体和箱内进行擦拭消毒。

显微镜使用规则：

1）显微镜使用前，用酒精棉对载物台从中间至周围进行擦拭消毒。

2）离开细胞室时或长时间不用时，必须及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量不要频繁开关显微镜电源。

超净工作台使用规则：

1）双手进入超净工作台操作时，需要先戴上手套并且使用酒精对手套进行擦拭消毒，操作中需要要到的枪、洗耳球、镊子等也需要进行擦拭消毒。

2）经过高压消毒烘干物品放入超净工作台后，需要进行紫外线照射30分钟。

3）超净工作台上所有消毒的物品尽量不要用手去触摸。

4）在消毒时超净台上使用的移液管、枪头，etc等物品需装入铁筒、枪头盒，etc等容器中，灭菌烘干后，拿入细胞房。

5）实验时，所有物品不要放在超净工作台的通风口附近。

6）实验结束后，必须立刻处理废物。并用酒精对实验台台面进行消毒。

培养基及胰酶的使用：

1）配制培养基时必须严格的进行无菌操作，确保培养液及胰酶无菌。

2）培养基配制时，用来装培养基的瓶子不能重复使用。

3）将胰酶分装到15ml离心管中，使用完后请勿丢弃，洗净后灭菌可以重复使用。

4）培养液及胰酶不得与他人混用

5）每次使用前，培养液及胰酶需要提前预热。

6）每次使用后，必须用封口膜封口，防止被污染。

7）如有污染，可经过滤后使用。

8）存放培养基等的冰箱，请注意清洁

9）没有经过灭菌，请不要重复使用装过胰酶、P/S的瓶子。

10）当需要使用他人培养基时，需要提前告诉。需及时补充酒精、酒精棉球等实验所需的耗材。

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细胞培养箱是提供稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。下面就让小编为你介绍一下细胞实验的方法。

一、细胞复苏实验

细胞实验在无菌的环境下进行操作至关重要，实验操作时需要戴上手套并用酒精对手套进行消毒处理。

1.为了确保实验在无菌的环境中进行，实验操作台需要用照射消毒半个小时，实验所需的无菌吸管，无菌枪头，1000μl的移液枪，一次性吸管，中型培养皿以及酒精灯、废液缸等也需要消毒。

2、加入2—3ml细胞培养基，即10％FBS（胎牛血清）和DMEM高糖备用。

3.从零下80度的冰箱里取出需要复苏的细胞，放入37℃的水浴中摇晃让其迅速溶解，细胞溶解后，将其置于1000r/m的离心机中离心5分钟，然后取出。

4.将离心后的细胞

弃上清，用移液枪取1ml培养基轻轻吹打均匀，取出细胞匀浆加入到之前加好培养基的培养皿中，振荡均匀，以使细胞在培养皿中生长均匀，吧培养皿在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

5、等到细胞完全贴壁生长时取出换液。

二、细胞换液

所有实验均需在无菌环境下操作。

1.将酒精灯、一次性吸管、废液缸、镊子等这些实验所用到的耗材放入无菌操作台用紫外线进行消毒杀菌。

2.将培养的细胞从培养箱中取出，用倒置显微镜进行观察。

3.用酒精对培养皿进行消毒，然后将培养皿放入无菌操作台，弃原有的培养基，使用PBS冲洗两遍。

4.往培养皿中加入新的培养基，用倒置显微镜进行观察。

5.往培养箱内重新放入换好液的培养皿进行培养

三、细胞传代

在培养皿或培养瓶中，当细胞占内壁表面80％的比例时，就需要进行

传代。

1.将实验所用到的耗材放入无菌操作台用紫外线进行半小时的消毒杀菌。

2.将需要传代的细胞从培养箱中取出，然后放入无菌操作台，弃原有的培养基，使用PBS冲洗两遍。

3.加入1ml左右的胰酶对细胞消化4分钟，然后用倒置显微镜进行观察。

4.观察到细胞从贴壁状态变为悬浮状态，且变圆变小

5.加入2倍胰酶的培养基终止消化，用一次性吸管吹打使细胞全部悬浮。

6.往1500r/m离心管中放入该细胞悬液，离心5分钟。

7.从其中一个离心管中取出细胞，弃上清，入1ml的培养基吹打均匀，然后加入到全新的已经加好培养基的培养皿中，振荡均匀，放入培养箱中进行培养。

8.对其他离心管中细胞进行冻存，往其他离心管加入900μl的冻存液（20％FBS），然后避光加入100μl的DMSO（二甲基亚砜）。

9、做好标记并用封口膜封好，放入4℃冰箱冻存40分钟

10、把4℃冻存的细胞取出放入-20℃冰箱冻存20分钟，Z后后放入-80℃冰箱长期保存

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细胞培养箱是提供稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。以下是三气细胞培养箱技术参数，就让小编带你了解一下吧。

三气细胞培养箱技术参数

1.三气细胞培养箱能够实现细胞体外培养的缺氧（＜20.8%）、极端低氧（0.1%-3.0%）、高氧(≥20.8%）实验条件；

2.三气细胞培养箱是由独立的气体控制器和细胞培养托盘室两部分组成，细胞培养室能够放到其他大体积温控箱体内使用。

3.高精度进口气体控制器，能够同时控制细胞培养托盘室内的氧气浓度和二氧化碳浓度，随时按预设定值快速到达和维持气体浓度。

4.氧气浓度设定的范围为0.1%—99.9%，能够调节调分辨率0.1%；二氧化碳浓度设定的范围0.1%—20.0%，能够调节调分辨率0.1%；

5.细胞培养托盘室能够实时反馈和校正细胞培养环境的O2和CO2浓度。；

6.不需要充预混合气体，而是由控制器和传感器控制反馈实时气体浓度，自动控制调节进气量达到设定浓度，而且不容易波动，恢复时间快；

7.细胞培养箱箱体是由透明的有机材料外壳和不锈钢层架组成，能够完全拆卸进行彻底的清洁；配有两块标准隔板数量和一个不锈钢水盘；

8.培养箱配有磁吸式前门，密封性好，能够降低气体的消耗；

9.标配探头适配器，配有风扇有利气体循环，配气体过滤膜，降低污染，适合严格的细胞培养要求；

10.气体控制器可外接2个气体钢瓶，二氧化碳及氮气（低氧要求）或氧气（高氧要求）钢瓶。

11.标准校准气体：一小瓶10L10%CO2和90%O2混合气体。

12.电压要求220V。

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• 有哪些类型的细胞培养箱

细胞培养箱是提供稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。下面就让小编带你了解一下细胞培养箱的使用方法。

使用方法：

1.暂时不要打开钢瓶，先将减压阀装在二氧化碳钢瓶上。为了防止漏气，需要将培养箱的二氧化碳进气管接头和减压阀输气管接头相连，用压紧圈压紧，防止漏气。

2.使用酒精把二氧化碳培养箱箱体内擦拭干净，然后打开箱体背后的紫外线开关，进行消毒1到2小时。

3.用加水管把箱体加水口和水龙头相连。

4.接通电源，开关调到“1”的位置，绿色的指示灯会亮起来。

水套式二氧化碳培养箱必须先进行加水，打开水龙头，慢慢地给水箱加水，水位渐渐升高，在地水位指示灯灭了3到5秒后停止加水，这个时候，水位在低、高位之间，水位等都不亮，可以使用培养箱。

将温度设定值调节到适合的温度，加热指示灯应该会亮，表明正在加热。如果环境的温度超过25度，那么需要使用空调给周围环境降温。

把二氧化碳控制开关调到“0”的位置。当温度升高道设定值之后，缓慢的拧开减压阀旋钮。使减压阀的输出压力是0.05MPa，指针在刻度线的中间。然后设定二氧化碳的浓度，开启二氧化碳控制开关，使得二氧化碳进入箱内。当二氧化碳到设定的值时，设备会空气和二氧化碳的补气状态。

当温度达到设定值且波动不大，二氧化碳浓度和箱体湿度都达到要求时，就能够进行细胞培养。

如果diyi次使用或长时间没有使用，在细胞培养之前必须进行培养箱内的污染检查。

5.在细胞培养完成之后，打开箱门取出培养皿，把没有培养的皿重新放进去，留意是否需要补充水分。如果不再培养，那么应该首先关闭钢瓶，然后关闭空气流量计和二氧化碳流量计，把二氧化碳进气开关调到“0”的位置。Z后关闭电源。如果很长时间不进行细胞培养，那么Z好把水盘取出，擦干净工作室。

6.把三十七度当作设定值调节温度

7.风量的大小会影响培养箱温度的控制，所以要把风量调到适合的大小。

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