细胞培养箱的作用
细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器,是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,广泛应用于微生物、农业科学、YL实验等科学研究和生产。
细胞培养的原理
将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
为什么细胞培养需要在细胞培养箱中?
CO2既是细胞代谢产物也是细胞所需成分,主要与维持培养液的pH有直接关系。动物细胞多数需要微碱性环境,pH为7.4左右。在细胞培养过程中,随着CO2释放量的增多,培养基会变酸,因此常加入NaHCO3来调节pH。NaHCO3具有释放CO2的倾向,加入CO2可以YZ这个反应的进行。
细胞培养箱中CO2浓度应与培养液中NaHCO3浓度相平衡,细胞培养箱的气体环境一般是95%的空气和5%的CO2。
并非只有细胞培养箱才能做细胞培养,主要是细胞培养箱可以省去很多麻烦。普通的恒温培养箱,生化培养箱也可以做细胞培养。但是要时刻监视溶液中的PH值,湿度,工作量增加很多,失败概率也增大很多。所以细胞培养一般在细胞培养箱中。
细胞的初代培养
初代消化培养法:
1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4、剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5、消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6、分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7、计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8、培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
初代组织块培养法:
1、剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2、摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3、轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。
4、培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
细胞的传代培养
1、吸除旧的DMEM培养液:拿出吸管(要拿吸管的上端),插入与抽滤瓶相连的橡胶管中,在酒精灯外焰灼烧灭菌,细胞培养瓶倾斜将吸管插入瓶底部一角,吸出旧的DMEM培养液,将用后的吸管弃于废弃缸里。
2、消化:拿出5mL移液管,酒精灯过火灼烧,吸取2mL0.25%胰酶,混匀,放于37℃孵箱中消化5-6min。取下用后的移液管。
3、中和:从孵箱中拿出培养瓶,显微镜下观察细胞是否被完全消化下来,5mL灭菌后移液管加入3mLDMEM培养液终止消化。反复吹打混匀;吸出中和液转移到50mL离心管中。
4、离心收集细胞:配平后离心200×g,3min。将新的DMEM培养液加入新培养瓶中,2mL/瓶(培养瓶底面积为25cm2)。
5、重悬细胞:离心后吸出中和液,(先吸出表面泡沫,一定注意不要吸出细胞)。加入新DMEM培养液(按2mL/瓶和细胞传代数计算加入的培养液体积),反复吹打使细胞充分混匀,要尽量减少产生气泡。
6、分装:混匀后将细胞分装,按2mL/瓶得体积加入培养瓶中,充分混匀。记号笔标记细胞名称,培养液,细胞传代数,传代日期,实验人员。
7、培养:将细胞放于37℃,4%CO2细胞培养箱培养。将0.25%胰酶,细胞培养液密封好放于4℃冰箱中保存。
8、清洁安全柜:实验完毕后,盖灭酒精灯,关闭真空泵,用酒精棉球擦干净操作台表面。
9、观察:每天观察细胞,并记录细胞生长状态。
细胞培养的注意事项
1、紫外消毒过程中会产生臭氧分子,对人体有害。一般情况下,消毒后至少半小时后再进入。
2、所有的实验器材都要经过消毒处理;所有的细胞操作都在安全柜中进行,每一步都要注意不能用手碰到瓶口,培养液不能碰到瓶口,拿培养瓶时要使培养瓶瓶口微微翘起。
3、细胞消化时间不能太长,要让细胞尽快脱离不舒服的环境;离心时离心机转速不能太高,实验前要设定好离心转速和时间;重悬细胞时要保证细胞完全混匀,在显微镜下观察细胞是一个一个的。
4、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次Z好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
5、每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 细胞培养箱的作用
- 细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器,是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,广泛应用于微生物、农业科学、医疗实验等科学研究和生产。
-
- 细胞培养箱的使用方法
- 细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
-
- 细胞培养箱的原理
- 细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器,能很精确地提供细胞培养需要的温度、湿度、气体环境等参数,性能稳定、响应迅速、可靠性高,且能有效防范对培养细胞的污染。
-
- 细胞培养箱的污染防护
- 细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
-
- 细胞培养箱消毒灭菌
- 细胞培养箱是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,细胞培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养。
-
- 有哪些类型的细胞培养箱
- 细胞培养指的是在体外模拟体内的环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),让它生存、生长、繁殖并且能够维持主要的结构和功能的一种方法。
-
- 三气细胞培养箱技术参数
- 细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
-
- 细胞培养箱的常见污染有哪些
- 细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
-
- 二氧化碳细胞培养箱的工作原理和特点
- 培养箱是要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。
-
- 柱温箱的作用
- 色谱柱温度控制在gao效液相色谱分析系统中有着越来越高的要求,药典和很多新的分析方法对于柱温也给出条件。
-
- 硫化仪的作用
- 用来对橡胶硫化过程的焦烧时间、正硫化时间、硫化速率、粘弹性模量以及硫化平坦期等性能指标进行分析、测定的仪器。其是国家规定的用来进行产品质量的检验、胶料配方的研究以及新产品的研制的检测仪器。
-
- 超净工作台的作用
- 超净工作台,又叫做净化工作台,其设计的目的是为了对现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求有所适应。
-
- 培养基分装仪的作用
- 培养基品质的高低对于实验室的实验结果具有决定性的影响,因此,各种无菌培养基的自动分装必不可少。
-
- 烟气分析仪的作用
- 烟气分析仪是利用电化学、光学等传感器连续分析测量CO2、CO、NOx、SO2等烟气含量的设备,在有烟气排放的各行业应用广泛。主要用于小型燃油、燃气锅炉污染排放或污染源附近的环境监测手持使用。
-
- 酮体的作用
- 酮体是对肝脏中脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸、β-羟基丁酸及丙酮三者的统称。进食糖类物质也不会导致酮体增多,肝脏具有较强的合成酮体的酶系,但却缺乏利用酮体的酶系
-
- 酮的作用
- 酮体主要是在肝脏细胞中的线粒体中生成。发生生酮作用是对血液中葡萄糖水平低下或是细胞中的碳水化合物储备(如糖原)耗竭情况下作出做出的一种反应。生酮作用是指脂肪酸降解过程结果所致的酮体生成过程。
-
- 硫酸钾的作用
- 硫酸钾纯品是无色结晶体,是指—种重要的含硫、钾元素的无氯钾肥,农用硫酸钾外观多呈淡黄色。硫酸钾的吸湿性小,不易结块,物理性状良好,施用方便,是很好的水溶性钾肥。
-
- 硼酸的作用
- 硼酸常态下是一种无机结晶弱酸,硼酸在生产生活各个方面有广泛应用,下面为大家整理的硼酸在各个方面的作用。
-
- 凹透镜的作用
- 凹透镜所成的像总是小于物体的、直立的虚像,凹透镜主要用于矫正近视眼。近视眼主要是由于晶状体的变形,导致光线过早的集合在了视网膜的前面。凹透镜则起到了发散光线的作用,使像距变长,恰好落在视网膜上了。
-
- 凸透镜的作用
- 凸透镜是指中间厚、边缘薄的透镜(至少有一个表面制成球面,亦可两面都制成球面)。凸透镜可用于放大镜、老花眼及远视的人戴的眼镜、摄影机、电影放映机、幻灯机、显微镜、望远镜的透镜等。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论