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细胞核的分离技术说明

本文由 上海研生实业有限公司 整理汇编

2024-10-03 20:16 1107阅读次数

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细胞核的分离技术说明(1)细胞悬浮于适量预冷的溶液A中,吹打均匀后加入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中,一手持之,一手将匀浆杵垂直插人管中,左右转动同时上下移动匀浆杵,研磨若干次,用3层纱布过滤后(也可采用低速离心的方法)以去除未破裂细胞,后收集匀浆液于离心管中,然后制备一张滴片,做好标记,显微镜下观察完整细胞数量。如果细胞数量过多,则继续匀浆,如果非常少,则匀浆完毕。(2)将装有匀浆液的离心管配平后,放人低温离心机,4℃,以2500r/min离心15min;弃上清,将沉淀物用6ml含0.1%(V/V)TitonX-100的溶液A悬浮沉淀物,以2500r/min,离心15min;弃上清。(3)将沉淀悬浮于6ml溶液B中,取6支超速离心管,每管加6ml溶液C,然后把细胞核悬液铺在溶液C上层,以25000r/min离心60min。(4)弃去上清,用溶液A轻轻荡洗管壁及沉淀物表面两次。将离心管倒置,用滤纸擦干管口。(5)向离心管底部滴加几滴溶液A,用玻璃棒轻轻搅匀,然后补加10ml溶液A,以2500g离心20min,弃上清液,沉淀物为纯化的细胞核。

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