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多色共聚焦显微镜是当今细胞生物学实验室中的一种基本技术。为了揭示生物系统的复杂性，需要能够同时分析样本中的多个结构、分子和微环境，并将它们相互关联。这可以通过使用不同颜色的荧光标记或生物传感器标记每个感兴趣的特征来实现，然后进行同时或顺序的多通道成像，以捕获每个探针在特定通道中的信号。然而，这种“多重化”方法的荧光染料数量是有限的。本文将深入探讨限制多色共聚焦显微镜多重化能力的一些挑战，以及改善荧光染料分离并增加可区分荧光探针数量的一些策略。