荧光定量PCR技术
Real-Time PCR 技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，Z后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。下面就让小编带你了解一下荧光定量PCR技术。
和普通PCR的差异
荧光定量PCR技术，然而，实际上，PCR扩增曲线是S形曲线，而不是不是标准的指数曲线。
这是由于扩增规模随着PCR循环的增多而迅速增大，Taq酶、dNTP、引物，甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不能达到要求，从而导致PCR的效率越来越低，产物增长的速度也越来越低。当所有的Taq酶都被饱和以后，PCR就进入了平台期。由于各种复杂环境因素的相互作用，难以精确控制不同的PCR反应体系进入平台期的时机和平台期的高低。因此，即使是多次PCR重复实验，，拥有基本一致的各种条件，也会得到大不相同的各种结果。因此，起始DNA拷贝数不能够按照Z终PCR产物的量直接计算出来。
荧光定量PCR的方法
荧光定量PCR使用荧光探针和荧光染料两种荧光化学，荧光定量 PCR 的方法也有特异类和非特异类两类。在PCR反应中，产物通过利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测，称为特异性检测方法。在PCR反应体系中，将过量荧光染料加入，荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射出荧光信号。叫做非特异性检测方法。第二种方法更容易实行，然而diyi种方法增加了探针的识别步骤，具有更高的特异性。
特异性Taqman水解探针法
Taqman荧光探针是Taqman荧光定量技术的基础，Taqman荧光探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时，淬灭基团吸收发射基团发射的荧光信号。
当PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性酶切降解了探针，分离了荧光发射基团和荧光淬灭基团，从而使得荧光监测系统可接收到荧光信号，也就是说，每当有一条DNA链被扩增，就会形成一个荧光分子，使荧光信号的累积与PCR产物的完全同步得以实现，从而实现定量，FAM, TET, VIC, HEX为常用的荧光基团。
非特异性SYBR Green I染料法
SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，在游离状态下，SYBR Green I发出的荧光微弱，然而一旦和双链DNA结合后，大大增强了荧光效果。所以，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量有密切的关系，PCR体系存在的双链DNA数量可以根据荧光信号检测出来。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 荧光定量PCR技术
- Real-TimePCR技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
-
- 荧光定量基因扩增仪
- 荧光定量基因扩增仪的PCR扩增原理和普通基因扩增仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。
-
- 荧光定量PCR定量方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。
-
- 实时荧光定量PCR
- 实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
-
- 荧光定量PCR的注意事项
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。
-
- 荧光定量PCR的应用
- 实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点，此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域。
-
- 荧光定量PCR检测方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。
-
- 荧光定量PCR仪介绍
- 实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
-
- 荧光定量PCR的2个概念和特点
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。
-
- 实时荧光定量pcr仪的计算原理
- Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。
-
- 荧光定量PCR的技术原理和化学方法
- 将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。
-
- 普通PCR仪和荧光定量PCR仪的操作规程
- 聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，通过高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应形成一个周期，目的DNA迅速扩增，其具有节约时间，操作简单，高灵敏度，强特异性等特点。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。
②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论