薄层扫描仪操作方法
薄层扫描仪是可以对斑点进行扫描的专用分光光度计,用可见光或紫外光作光源,线性扫描或锯齿扫描薄层板展开后的斑点,该斑点就吸收该组分特征波长的单色光,剩余的单色光经透射或反射或发射荧光,由检测器积分起来,获得这块斑点面积的待测物质含量。
操作方法
(1) 薄层板制备
除非有其他规定,不然在研钵中向一方向研磨混合1份固定相和3份水,将表面的气泡去除以后,往涂布器中倒入,涂布器在玻板上平稳地移动进行涂布,将涂好薄层的玻板取下,放在水平台上在室温下晾干,后在110摄氏度烘30min,就放在有干燥剂的干燥箱中备用。使用之前对其均匀度(可通过透射光和反射光检视)进行检查。
(2)点样
除非有其他规定,在薄层板上用点样器点样,通常是圆点,样基线距底边2.0厘米样点直径及点间距离和纸色谱法相同,点间距离根据扩散情况而定,不要对检出有所影响Z好.点样时必须留心不要对薄层表面有所损伤.
(3) 展开
如需预先用展开剂饱和展开缸,可以先将足够量的展开剂往缸中加入,并且将二条与缸一样高、宽的滤纸条贴在壁上.一端往展开剂中浸入,将缸顶的盖密封使系统平衡或根据正文规定操作。在展开缸的展开剂中放入点好样品的薄层板,距薄层板底边0.5~1.0cm为浸入展开剂的深度,将缸盖密封,等到展开至规定距离(通常是10~15cm),将薄层板取出,晾干,根据各品种项下的规定检测。所以应当使得斑点在一定浓度范围内呈线性得到保证的情况下
(4) 薄层扫描法
除非有其他规定,能够按照各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明,和具体情况相结合,对吸收法或荧光法进行选择,使用双波长或单波长扫描。因为有非常多的对薄层扫描结果有所影响的因素。在同一块薄层上展开供试品与对照品后扫描,对定量进行比较并计算来使得误差减少。各种供试品,仅有良好的分离度和重现性均获得的薄层色谱,,才能使得结果非常的满意。
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