电泳分离的应用、分类及主要因素
溶质在电场移动中移动速度不同而分离的方法,叫做电泳分离,溶质必须带电,它于表面吸附离子而带电或者它本身就是离子。因为其带电性质及其颗粒大小和形状不同,不同的物质在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也各有差异,所以可以分离出它们。它们所带电荷的种类决定了物质颗粒在电场中的移动方向。净电荷为零的颗粒在电场中不移动,带负电荷的颗粒则向阳极移动,带正电荷的颗粒向电场的阴极移动。
影响电泳分离的主要因素
颗粒在电场中的移动速度由其本身所带的净电荷量来决定,同时颗粒形状和颗粒大小也是其的影响因素。除此以外电场强度、溶液pH、离子强度、及支持体的特性和温度等外界条件也会对颗粒在电场中的移动速度产生影响。
1.电渗
在电场中,溶液对于固体支持物的相对移动称为电渗
2.支持介质的筛孔
分离生物大分子的电泳迁移速度明显的受到支持介质的筛孔大小的影响。
3.温度
电泳时电流通过支持介质会产生热量。
4.电场强度
每厘米距离的电压降即是电场强度。电场强度对颗粒的泳动速度起着十分重要的作用。电场强度越高,带电颗粒的泳动速度越快。根据电场强度的大小可将电泳分为高压电泳和常压电泳。常压电泳的电场强度一般为2~10V/cm,电压为100~500V,电泳时间从几十分钟到几十小时,多用于带电荷的大分子物质的分离;高压电泳的电场强度为20~200V/cm,电压大于500V,电泳时间从几分钟到几小时,多用于带电荷的小分子物质的分离。
5.溶液的pH
溶液中颗粒分子的解离程度取决于溶液的pH,也就是说颗粒分子所带净电荷的多少取决于溶液的pH。对于两性电解质来说不仅颗粒分子所带电荷的种类取决于溶液的pH,而且净电荷的数量也由溶液的pH来决定。溶液的pH等于某溶质的等电点时,其净电荷为零,泳动速度也等于零,溶液的pH离其等电点越远,颗粒所带净电荷越多,泳动速度越快,溶液的pH离其等电点越近,颗粒所带净电荷越少,泳动速度越慢。所以应该在适当的数值上选择电泳时溶液的pH,并且需采用缓冲液维持pH恒定。
6.溶液的离子强度
溶液的离子强度越高,颗粒的泳动速度越慢。
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