使用Tecan Spark10M实现长时间无人值守的细胞活性、毒性和凋亡检测
对细胞膜完整性和细胞活性的长时间动态监测,例如长达72小时的实时观测,可以帮助了解细胞原发性坏死和继发性坏死的发生时间。更进一步,通过对caspase-3/7活性的检测,我们还可以在细胞毒性事件中辨别凋亡和坏死这两种不同的机制。为此,我们采用了Promega的三种检测试剂。
其中,RealTime-Glo?和CellTox? Green试剂在细胞铺板时加入,用于长时间实时检测。CaspaseGlo? 3/7试剂通过Spark的加样器加入,裂解细胞后实行终点法检测。
通常情况下,为了实现活细胞动态观测,需要每隔一段时间把细胞板从培养箱中取出进行检测,再放回培养箱中继续培养,有时反反复复几十次。另外,很多检测细胞活力和毒性的试剂都是终点法,为了实现细胞的动态检测,需要准备多块微孔板在不同的时间点进行测定,很不方便。
在Tecan Spark10M多功能微孔板检测仪上,使用Promega细胞健康检测试剂,这一切都将变得非常简单。RealTime-Glo? MT Cell Viability Assay及CellTox? Green Cytotoxicity Assay无需裂解细胞,分别使用发光和荧光作为检测信号,可实现长达72小时的动力学检测。
Tecan Spark 可配备自动化无人值守实验所需的所有功能温度及气体控制、湿度控制、自动开盖抓手和自动进样器等。仪器内部可极ng确控制5% CO2和37℃;湿度盒可有效防止液体挥发;开盖抓手可在读取信号或自动加样前自动揭去板盖,并在检测完成后盖上,整个流程无需人工介入。
细胞毒性事件发生后,我们还需要在合适的时间窗口进行caspase-3/7活性检测,以明确细胞是凋亡还是坏死。
caspase-3/7的检测窗口一般很短暂,检测时机选择很关键,在不同窗口检测会得出凋亡或坏死的不同结论,并直接影响药物作用模式的解释。
有试验表明,caspase-3/7的活性与药物介导的细胞毒性有相关性,即药物处理后,细胞毒性荧光信号上升到对照组1.4倍时,caspase-3/7的活性是可以检测的。据此,Spark 10M可以以此数值为阈值条件,控制自动进样器完成对整板样本的Caspase-Glo3/7试剂加样,裂解细胞并孵育半小时,自动完成数据读取。
总体表明,在Tecan Spark10M 多功能酶标仪上,配套promega细胞健康试剂盒,可以全自动化、无人值守地在同一次试验中同时完成细胞活力、毒性和凋亡三组数据,既有动力学方法,也有终点检测。同时,Spark还可以帮助优化细胞凋亡检测的时机,有助于分析药物细胞毒性的机制和成因。
更多信息请参考
http://lifesciences.tecan.com/products/reader_and_washer/microplate_readers/spark10m
参考材料
Anwalkawaymonitoringcytotoxicityviabilityandapoptosis (Tecan 399451 V1.0
05--2016)
RealTime--Glo? MT Cell Viability Assay Kit Protocol (TM431, 9/14)
CellTox? Green Cytotoxicity Assay Kit Protocol (TM375, 5/15)
Caspase-Glo?3/7 Assay Kit Protocol (TB323, 3/15)
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