二维液相 | 披荆斩棘，所向披靡！

来源：安捷伦科技（中国）有限公司分类：商机 2022-04-14 12:33:39 511阅读次数

二维液相作为一种强大有力的分离工具，已经在越来越多的领域得到了广泛的应用，而且随着仪器控制及数据处理功能更具自动化智能化的提高，也使得二维液相的使用也变得越来越简便，大有旧时王谢堂前燕，飞入寻常百姓家的势头，2020 版中国药典中收载二维液相方法并用于维生素 D 的测定，无疑是对二维液相方法普及的一次“顶流宣传”.

复习过“历史文章”之后，是不是感觉到热血沸腾，跃跃欲试？不过，实际操作下来，却发现事情并没有看上去的那么简单：为什么我的方法在第二维上的分离和峰型总是有些不尽如人意？峰拖尾，分叉，保留弱，这些都是怎么回事？说好的一次进样解千愁呢？

恭喜同学，你已经注意到了二维液相最关键的核心问题，这些情况的产生，都和第一维与第二维条件的兼容性相关。我们知道，二维液相优势就是利用第一维和第二维不同的选择性增加方法的整体分离能力，这就要求第一维和第二维使用差异较大的色谱柱和流动相条件，比如使用 Hilic 和反相机理组成的二维体系就是一个很典型的例子。

接下来，就是要划重点的部分了：由于溶剂的差异，第一维的流动相溶剂在通过接口（二维切换阀）转移到第二维的时候，不可避免的会对第二维分析产生影响，这种影响有点像我们做一般液相方法的时候遇到的“溶剂效应”，从而导致第二维的色谱峰产生异常。

为了解决这个问题，大家想了很多办法，这些思路和解决溶剂效应的思路很类似，可以概括为三大招式：

1 // 溶剂置换

2 // 减少进样量

3 // 在线稀释减少馏分溶剂洗脱强度

招式一，顾名思义：就是简单明了的去除掉第一维的流动相，然后再用第二维流动相“复溶”样品并进行分析。当然，这一切都是需要在接口部件上在线进行的，所以这个过程略显繁琐：这就需要复杂的接口设计比如加热，真空等实现去溶剂功能，这就让设备构造变得很复杂且操作十分不友好，除此之外，如果被测物比较不稳定，或者第一维流动相中有些无法去除的添加剂，就会严重限制这种方式的应用，所以，招式一很快被打入了冷宫。

于是，大家统一开始研究看上去最为简单易用的招式二， 通过减小接口转移进第二维的馏分总量来达到控制溶剂效应的目的，并且大家发现如果转移馏分的体积与接口上用于手机馏分的 loop 环体积比值越小，去溶剂效应的效果就越好，所以大家通常会采取“部分填充（Partial Loop Fill）”的模式来转移馏分，这种模式虽然操作简便，但是却对第二维的灵敏度带来了很大挑战，而且也不能完全洗脱一些强度非常大的第一维溶剂带来的影响，所以招式二看来也并不具有可取之处。