仪器网（yiqi.com）欢迎您！

单个B细胞抗体技术作为新一代抗体开发技术，可以从单个B细胞中高效、快速的分离抗体，是继杂交瘤、噬菌体展示后又一抗体产生技术的突破。它是根据每一个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列，以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，通过单细胞PCR技术从单个抗体分泌B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。

这种技术的特点，是“从打过胜仗的老兵身上找武器”。一是省去了先用抗原免疫小鼠这一步，二是不再依赖必须与骨 髓瘤杂交的小鼠B细胞。有了这一段基因，无论插到什么细胞都可以培养并量产，其效果类似大肠杆菌生产基因重组人胰岛素。

典型的单个B细胞技术流程

它的主要流程为先从免疫动物或人的身上获取外周血单个核细胞，再进行抗原特异性结合B细胞的分选，接着通过PCR扩增技术得到单个B细胞抗体可变区基因，再通过载体构建获得抗体表达，最 后进行产物验证。在此过程中，单个B细胞的分离是单B细胞技术最关键的步骤。目前有多种基于单细胞分离的技术，如磁珠分选法、微雕刻和ISAAC方法，流式分选法及微流控分选法等。

流式分选法是目前单B细胞技术应用较广泛的一种，它是基于抗原抗体的特异性反应，利用荧光素标记的B细胞表面分子的抗体以及标记的特异性抗原，通过多色流式分析与分选，筛选抗原特异性B细胞。流式分选可以直接将单个抗原特异性B细胞分选入细胞培养板的单孔中，进行后续的抗体基因扩增与测定。该技术优点：分离B细胞快速、准确、大量、多参数同时分析。

丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特的CytoFLEX SRT分选型流式细胞仪是新一代的高效细胞分选平台，适用于多色免疫分型，可进行稳定高表达细胞系的开发、单细胞测序应用等。CytoFLEX SRT流式细胞分选仪提供七种不同检测器配置，多达 15 种荧光颜色用于区分细胞群，能够区分细胞间的细微差异，多色应用超高灵敏度提高筛选精度；拥有4 路分选模式、混合分选模式、复杂分选逻辑等分选方式，能够捕捉其他分选液流中丢弃的细胞，并保存宝贵细胞。

贝克曼库尔特CytoFLEX SRT流式细胞分选仪

CytoFLEX SRT流式细胞分选仪使用垂直分选模式（Straight Down Mode），利用无电垂直向下的液流，而不是加载电荷的偏转液流。在进行单细胞索引分选时，使用这种模式可以在精确分选单细胞的同时获得更好地分选后活率。

贝克曼库尔特VICELL-XR评估

EL4小鼠T细胞淋巴瘤细胞的培养后活率

CytoFLEX SRT配套的数据获取和分析软件界面直观，方便多色分析；采用创新的设置、监测和液流维持系统，实现工作流自动化，节省研发者大量时间和精力。

CytEXPERT SRT软件界面

此外，美谷分子仪器的CloneSelect 高通量单细胞分离系统，基于微流控分离技术，使用专有的喷墨式一次性单向分离槽，可以轻柔而高效地分离单个细胞。该系统拥有高分辨率的明场和荧光成像，可以对细胞进行分选图像采集，获得单克隆的图像证据，具有潜在的单个B细胞分离的应用价值。

CloneSelect 高通量单细胞分离系统

 单细胞分选过程图像记录

通过单细胞分离技术获得的单个特异性B细胞，经过单细胞PCR技术从B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因，并通过测序获得序列信息，再通过基因工程技术，进行载体构建、抗体表达和验证。

单个B细胞抗体技术制备的单克隆抗体，保留了丰富的基因多样性及轻重链可变区天然配对，并且制备效率高，目前已经广泛应用于抗病毒治 疗、神经性疾病治 疗、免疫疾病治 疗等抗体药物的开发。