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　　牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：96T25pg/ml-900pg/ml

　　使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)含量。

　　实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)水平。用纯化的牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)，再与HRP标记的脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)浓度。

　　试剂盒组成

　　130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(1600pg/ml)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

　　标本要求

　　1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步骤

　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　操作程序总结：

　　计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　保存条件及有效期1.试剂盒保存：;2-8℃。2.有效期：6个月