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蛋白质定量是许多蛋白质生物学工作流程的重要组成部分，是蛋白质电泳、蛋白质印迹、质谱和免疫分析等常用技术之前的必要步骤。与传统的BCA、Bradford等比色法测蛋白的方式相比，荧光法测蛋白动态范围更宽、准确性更高。

荧光蛋白质分析试剂盒对蛋白质具有高度选择性，在存在还原试剂的情况下也可具有高度准确性。试剂盒不仅可在通用的荧光计上进行检测，也可用带有荧光功能的酶标仪上进行测试。

试剂及仪器

•Qubit™ Protein Assay Kits（Thermo：Q33212）

•Qubit 4荧光计（Thermo）

•Fluo-200荧光计（奥盛）

•Feyond-A300多功能酶标仪（奥盛）

方法

•标品配置

•操作步骤

(1) 根据试剂说明书，制备染料Mix工作液及0、200及400ng/uL校准点试剂，校准曲线完成后，分别在Qubit4与Fluo-200上进行检测；

(2) 在96孔黑色平底微孔板的每孔中加入10uL标品溶液后，每孔中再添加190uL的Mix工作液，混匀后避光5分钟，开始仪器检测，标品与空白布局如图1，仪器参数如表1。

 表1 Feyond-A300参数设置

图1. 样品布局界面

结果

(1)利用Feyond-A300的内置数据处理软件，将蛋白标品浓度与荧光强度进行标准曲线拟合，采用四参数（4PL）拟合方式，得到曲线方程与曲线拟合度，R2接近为1（图2）。

图2. 蛋白标准曲线

(2)浓度范围在12.5 ng/uL~400ng/uL时，Fluo-200与Qubit4的检测浓度偏差均在10%以内，是Qubit的合理偏差。除接近极限浓度的最 低点外，Feyond-A300的检测浓度与Qubit4相比也在合理偏差内，且与理论浓度更为接近（表2）。

表2 三款仪器的检测数据

总结

Qubit 荧光检测蛋白试剂盒，不仅在Qubit仪器上可以适用，也可在Feyond-A300的荧光检测功能上适用，并且准确性基本无差异，荧光计检测无需建立标准曲线，仅需进行标品点的校准，便可直接进行浓度的测试，简单便捷。Feyond-A300的标曲保存功能，亦可满足该需求，仅需一次建立标曲后，将标曲保存于标曲库，后续仅需调取该标曲便可直接给出未知样品的浓度。