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　　本生阐述：细胞冻存管的使用步骤及常见问题

　　冻存管一般用作实验室细胞的低温保藏。冻存管又名冷冻管，是常用的实验耗材，多用于生物、医药、食品等行业。

　　冻存管介绍：

　　冻存管一般按容量划分为0.5ml，1.0ml，1.5ml，1.8ml，2.0ml，4ml，5ml，7ml，10ml等。一般的冻存管不能进入液氮里，只有特殊材料处理的才可以放入。同时冻存管还有双层的和无双层的带硅胶垫和没有硅胶垫的等种种，还有无色和杂色及各种纯色等不同。如果需要进入液氮保藏的就要选择密封的耐低温的专用冻存管，还要认清所购买的冻存管是否是无菌以及无DNA,RNA。

　　冻存管的使用步骤：

　　⑴ 从细菌纯培养物中挑取新鲜培养物配成大约为3-4麦氏比浊度的菌悬液接种与菌种保存管中。

　　⑵ 拧紧保存管，来回颠倒4-5次使细菌乳化，不能旋摇。

　　⑶ 把保存管放入冰箱保存(-20℃--70℃)

　　冻存管的常见问题：

　　1、问：Nunc冻存管可以灭菌吗?

　　答：虽然冻存管使用聚yixi材料制造，但是我们不推荐客户灭菌。

　　2、问：冻存管内旋盖和外旋盖有什么区别?

　　答：内旋冻存管为气相液氮气相中冻存样品而设计，管口硅胶垫增强了冻存管的密封性;外旋冻存管为机械设备如冰箱中冻存样品而设计，外旋盖的螺纹盖可以降低处理样品时的污染几率。

　　3、问：Nunc的冻存管可以浸入液氮(液相)中冻存样品吗?

　　答：Nunc的内旋冻存管可以在液氮中储存，由于硅胶垫增强密封性。但超低温度下，任何的密封材料都变得异常脆弱，理论上只要是机械密封就存在泄漏的危险，为了防止泄漏产品的危险，机械密封的冻存管必须密封在保护袋中。Nunc提供CryoFlex 密封管，热密封的聚yixi管专门为Nunc冻存管密封设计。将冻存管在液氮液相中冻存而没有使用CryoFlex 密封管是十分危险的，冻存管在液氮液相中冻存必须使用CryoFlex 密封管进行热密封。

　　4、问：当冻存管储存在液氮液相中而没有使用CryoFlex Tubing 时，如何正确的溶解复苏细胞?

　　答：在整个操作过程中必须穿戴保护服，包括手套，脸罩等。冻存管从液氮液相取出后必须在液氮气相中储存24h，这样可以使得液氮从冻存管中慢慢的蒸发和逃逸，从而降低冻存管中的压力。等在液氮气相储存24h后，将冻存管放入水浴槽，同时用毛巾覆盖，等熔融复苏结束后转移冻存物。

　　5、问：使用CryoFlex 密封管时需要热密封，这会不会影响细胞活性?

　　答：将样品加入冻存管以前需要将冻存管置于4℃ 冰浴槽。

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