天生C位，玩转离心 | 高效细胞收获与蛋白纯化指南
蛋白纯化是了解蛋白结构和功能以及开发有效治 疗方法的必要途径。蛋白既可从组织中分离，也可从细菌、酵母或哺乳动物细胞等生物体的表达过程中进行分离。可根据每种蛋白的氨基酸组成、大小、形状、等电点和溶解度等特性，开发出目标蛋白分离纯化的独特策略。
通常，蛋白纯化流程为：
1.细胞收获
蛋白纯化的首要步骤是从细菌、昆虫或哺乳动物的细胞、组织等培养物中分离出目标蛋白。细胞收获步骤通常使用大容量低速离心，连续流离心，微孔过滤，或深层过滤技术收集培养基中的细胞。
√ 可以连续处理样本 | √ 产量和活性优化更加简单 |
× 对原料质量的变化（例如细胞活力、细胞密度、培养基）高度敏感 | √ 大规模通常需要连续流转头 |
× 不适用于病毒/病毒载体等样本 | × 手动操作步骤较多 |
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2.裂解液澄清
继细胞沉淀和裂解后，蛋白纯化的第二个关键步骤是将蛋白与非蛋白污染物和细胞碎片进行有效分离。此步骤需使用高速转头。相对离心力需达到约25,000 x g。裂解液澄清过程中，目标蛋白或蛋白复合物越小，转速就越快，无需担心蛋白随亚细胞碎片沉淀。
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3.粗提纯
粗提纯步骤通常使用共沉淀搭配离心方法，或层析法进行提纯，从批量提取物中回收目标蛋白。
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4.初级纯化
a
色谱法
目标蛋白的初级纯化通常基于亲和、离子交换、疏水相互作用和尺寸排阻等色谱原理进行分离提纯。实践证明，96孔板高通量试剂盒非常适用于此类色谱条件的筛选，而微量和微型离心柱法可快速纯化少量重组蛋白。
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b
密度梯度离心法
高分辨率密度梯度离心法可用于亚细胞分离，从而高效分离线粒体或细胞核等特定细胞器中的目标蛋白。密度梯度离心通常需采用超速离心分离技术，离心时先将样品置于一个由惰性梯度材料形成的密度梯度液体柱中，离心后被分离组分以区带层分布于梯度柱中。
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5.浓缩及缓冲液置换
对于任何生物化学或生物物理应用而言，选择适当的蛋白纯化缓冲液和浓缩工具至关重要。多种带滤膜离心柱都可用于缓冲液置换和蛋白浓缩，如1K 至100K 的超滤浓缩离心管。
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标签：蛋白纯化
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