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概括

使用不对称场流分离（AF4）分析相对分子质量（M）和回转半径（Rg）并表征构象。 GEPs粒径分布较宽，AF4分离过程中存在空间变换效应，导致不同粒径的GEPs分子同时洗脱，无法准确表征其M和Rg分布及构象。 本文研究了恒定错流流速、指数衰减错流流速、样品质量浓度和间隔物高度对空间转变效果的影响。 结果表明，较高的样品质量浓度会导致空间转变现象的发生； 垫片的高度会影响样品的分离和保留时间，改变空间转变点（di）； 对于多分散GEPs样品，指数衰减错流流速不仅可以调节di，还可以提高样品的分辨率，缩短分析时间。 当样品质量浓度为0.50 mg/mL、进样量为50 μL、检测器流速为1.0 mL/min、垫片高度为350 μm时，初始错流流速从0.2 mL/min开始呈指数衰减至 0.05 毫升/分钟。 在半衰期为2min的条件下，解决了AF4分离GEP时存在的空间位阻转化问题。 此外，在最佳洗脱条件下，研究了不同来源、不同超声时间对GEPs M、Rg和构象的影响。 结果表明，随着超声时间的增加，云南和四川GEPs的Rg和M减小，分布变窄； 当超声时间为15 min时，来自云南的GEPs处于松散且高度支化的构象，来自四川的GEPs处于松散且高度支化的构象。 球形构象； 当超声时间增加到30 min或60 min时，两个产地的GEPs构象主要为高度支化结构，表明GEPs已被降解。 实验结果证明，在最佳洗脱条件下，AF4-MALS-dRI对GEPs的表征具有良好的重现性，GEPs的Rg和M的相对标准偏差分别为0.5%和1.7%。

第01部分：天麻的治疗

将四川和云南的天麻洗净，低温干燥，用多功能粉碎机粉碎，过80目筛，得到天麻粉。 称取天麻粉末10.0 g，置于250 mL烧杯中，加入80 mL 80%乙醇水溶液，搅拌均匀，置于水浴中，在60℃恒温浸泡2 h。 重复操作两次，然后以5000 r/min离心。 10分钟后，收集沉淀，干燥，研磨，得到脱脂天麻粉。

第02部分：GEP 的提取

参考文献提取方法，具体如下：称取脱脂天麻粉末6.0 g，置于500 mL烧杯中，加入180 mL去离子水，在70℃、160 W下超声处理15、30 、 、 60 min，然后3000 r/min离心20 min，提取3次，合并上清液，浓缩，浓缩液中加入5倍体积的95%乙醇水溶液，4℃静置°C过夜； 5000r/min离心10min，收集沉淀，分别用95%乙醇水溶液和丙酮洗涤3次，然后5000r/min离心10min。 收集沉淀，室温放置，丙酮完全蒸发后冷冻干燥，得到不同超声时间下的云南GEP（命名为Y-GEP-15、Y-GEP-30和Y-GEP-60）和四川GEP GEP（命名为 S-GEP-15、S-GEP-30 和 S-GEP-60）。

第03部分：GEP 解散

称取 2.0 mg 不同来源的 GEP 置于 20 mL 样品瓶中，加入 4.0 mL 去离子水，在 60 ℃水浴中以 200 r/min 搅拌 2 h，自然冷却至室温，得到质量浓度为 0.50 mg/mL GEPs 溶液。

第04部分：天麻多糖的AF4分析

以Y-GEP-15溶液为例，进行AF4-MALS-dRI分析。 按照上节方法配制Y-GEP-15溶液，使用350 μm聚酯垫片和10 kDa可再生纤维素膜形成AF4长流道，长度为26.5 cm； 载液为5 mmol/L NaNO3去离子水溶液(pH 7)； 样品质量浓度为0.5 mg/mL，进样量为50 μL，进样流速为0.2 mL/min，检测器流速为1.0 mL/min，初始错流流速从0.2 mL开始呈指数变化/min 衰减至0.05 mL/min，半衰期（t1/2）为2 min。 通过一阶 Berry 模型拟合确定 M 和 Rg：

其中K是光学常数，c是样品质量浓度（g/mL），Rθ是瑞利比，λ是波长（nm）。 获得的AF4数据用Astra 6.1.7软件处理，GEP的折射率增量(dn/dc)为0.145 mL/g。