为什么类器官培养体系中频频出现这款添加剂?
类器官是由多能干细胞(PSC)、新生组织干细胞或成体干细胞衍生的一种3D结构。在形成过程中,细胞自发地自组织成适当分化的功能性细胞类型和祖细胞,它们与体内的来源器官或组织高度相似,并至少再现器官的某些功能。
类器官培养在疾病建模和器官发育研究方面具有巨大潜力。随着近年来对类器官技术的发重视,已经有许多公开发表的方法可用于构建和培养多种类器官模型,但仍有某些类器官存在培养体系不够稳定,建模成功率低等问题,选择培养体系是开发成功的类器官培养系统的第一步。
一般而言,类器官培养基会在基础培养基基础上添加特定生长因子,细胞因子,小分子抑制剂,激素和添加剂等,合适的添加剂有助于培养体系更适合目标细胞系的生长。目前,国内已经发布了多个类器官团体标准,很大程度上推动了行业标准化的进程。其中,多个团体标准公布的类器官培养基成分中,都包含了GlutaMAX 这款添加剂。
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图1. 类器官团体标准中公布的培养基主要成分
GlutaMAX添加剂
那么,为何GlutaMAX添加剂这么受类器官研究者的青睐,它在类器官培养上有什么优势呢?
氨基酸是体外细胞培养的基本条件之一。在细胞培养中,氨基酸可作为培养基的原料,提供细胞所需的氮源和碳源,类器官培养体系中Z为常见的氨基酸是L-谷氨酰胺。它不仅可以作为辅助能源,也会参与蛋白质的合成和葡萄糖的产生。
L-谷氨酰胺在干粉状态下极为稳定,但在细胞培养基等水溶液中容易自发降解,生成有细胞毒性的副产物氨,影响细胞健康状态。
Gibco GlutaMAX是L-谷氨酰胺的二肽形式(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺),可以发挥与L-谷氨酰胺相同的功效。它在水溶液中极为稳定,在长期储存和培养过程中不会自发降解(图2),减少氨的生成(图3),从而提高类器官培养体系的稳定性,Z大程度减少有毒成分氨的累积,改善细胞存活率和生长情况。
图2. GlutaMAX与L-谷氨酰胺在DMEM中的稳定性比较
在 DMEM 中添加 GlutaMAX 添加剂或 L-谷氨酰胺,装瓶,37°C保存。每天采集样品,并在-20°C冷冻。然后用高效液相色谱法测定GlutaMAX 添加剂和L-谷氨酰胺水平。
图3. 含添加剂的培养基中的氨水平
向DMEM中分别加入GlutaMAX添加剂和L-谷氨酰胺,分装成小瓶后于37°C下储存。每天取样放入–20°C下冻存。利用HPLC法测定氨水平。
综上所述,GlutaMAX 可以更长久地保持细胞的健康状态。在3D培养领域,它已被广泛应用于各种类器官培养体系。
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