您知道吗？什么是F(ab)和F(ab ')2片段抗体？

来源：赛默飞世尔科技生命科学产品分类：商机 2024-08-05 16:15:13 23阅读次数

F(ab)抗体是什么？F(ab ')2抗体又是什么？得知小伙伴有疑问，这不趁新品上市之际赶快来回答一波。

F(ab)片段抗体是通过木瓜蛋白酶对IgG抗体进行切割，去除Fc区和铰链区得到的。因此它是单价的，大小约为整个IgG抗体的三分之一(~50 kDa)。

而F(ab')2片段抗体是通过胃蛋白酶切割IgG抗体获得的。它们缺少Fc区，但保留铰链区，铰链区通过二硫键将两个抗原结合位点连接在一起。因此F(ab’)2片段是二价的，大小约为整个IgG抗体的三分之二(~100 kDa)。

F(ab)和F(ab')2片段抗体都可以与各种标记(如荧光基团或酶)偶联，用于免疫分析。目前这些片段广泛应用于科学研究，增强特异性和敏感性，有助于获取准确可靠的实验结果。

图1所示F(ab)片段抗体。展示了来自全长抗体的F(ab)片段由VH、CH、VL和CL结构域的单个拷贝组成，它们共同形成一个单价抗原结合片段。

图2F(ab ')2片段抗体。展示了来自全长抗体的F(ab ')2片段由两个VH, CH, VL和CL结构域的拷贝组成，由两个CH结构域延伸的铰链肽之间的二硫键连接在一起。形成了一个二价抗原结合片段。

那么这样的抗体有什么好处呢？何必多此一举呢？当然好处多多。

组织渗透性更好

与全IgG抗体相比，F(ab)抗体片段由于其较小的尺寸和不含Fc区而具有若干优点。较小的尺寸可以更好地渗透到组织切片中，并在免疫组织化学(IHC)等应用中改善染色效果。

非特异性结合少

当处理表达Fc受体较多的细胞或组织（免疫细胞）时，缺少Fc片段的抗体带来的非特异性结合减少。与全IgG抗体相比，缺少Fc区也会降低免疫原性。

Fc 特异的F(ab)片段抗体能拓展更多颜色分析

例如，可以在同一实验中使用F(ab)山羊抗兔Fc特异性二抗和F(ab)片段兔抗山羊Fc特异性二抗。然而，使用IgG山羊抗兔二抗和IgG兔抗山羊二抗会导致较差的染色，因为这两种二抗会相互结合而不是靶向一抗。

虽然F(ab)片段体积更小，在降低免疫原性和顺序标记来自同一宿主的多种一抗方面具有优势，但F(ab’)2片段可能提供更高的亲和力和更好的靶标捕获。

了解这些片段的性质和优点，可以更好地设计实验，以提高灵敏度和特异性。

表1.片段抗体与IgG的特点比较

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部分结果展示

图3. 免疫荧光分析MCF7细胞比较Fc特异性F(ab)片段二抗与IgG二抗，展示F(ab)片段二抗渗透性更好。用H3K4me3重组兔单克隆抗体 (货号703849)，β微管蛋白单克隆抗体 (货号32 - 2600)，TROP2多克隆抗体(货号PA5 47030)标记。图b-d依次使用F(ab)-山羊抗兔IgG Fc二抗，Alexa Fluor 488 (货号A66785)；F(ab)-山羊抗小鼠IgG1 Fc二抗，Alexa Fluor 555 (货号A66782)；F(ab)-兔抗山羊IgG Fc二抗，Alexa Fluor 647 (货号A66784)。图g-i依次使用山羊抗兔IgG (H+L)交叉吸附二抗，Alexa Fluor 488 (货号A11008)；山羊抗小鼠IgG (H+L)交叉吸附二抗，Alexa Fluor 555 (货号A21422)，兔抗山羊IgG, Alexa Fluor 647。

图4. 使用F(ab)-山羊抗小鼠IgG1 Fc二抗Alexa Fluor 488（货号A66781）免疫组化分析小鼠结肠。

图5. 使用IgG 与 F(ab’)2 Alexa Fluor Plus 555 二抗免疫荧光分析人小肠（十二指肠），展示F(ab’)2组织渗透性、特异性更好。（左）使用 Invitrogen Cadherin-17 单克隆抗体（货号 60351-1-IG）和 Invitrogen Alexa Fluor Plus 555 IgG 二抗，对细胞连接区染色。（右）在同样的条件下，使用抗 Cadherin 17 的相同一抗（货号 60351-1-IG）和 Invitrogen F(ab')2-羊抗小鼠 IgG（H+L）交叉吸附的二抗，Alexa Fluor Plus 555（货号 A48287），对细胞连接染色。采用Invitrogen EVOS M7000 ， 4X 放大倍数采集图像。

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