仪器网（yiqi.com）欢迎您！

讲个笑话：某分子生物学PhD去购物，总价 94，他又买了两块钱的东西，心想终于凑了个整数

哈哈哈哈哈老PCR人一秒get！

1980 年代，Kary Mullis Z先提出了 PCR 技术，时光荏苒，如今，PCR 已成为生命科学实验中应用Z为广泛的技术之一。

无论是日常中进行突变检测的科研应用，还是诸如新冠病毒检测的医学应用，都离不开 PCR 实验熟悉的身影。

由于 PCR 实验应用实在太过于普遍和广泛，以至于实验室的许多小伙伴反而会忽视其中的各种细节。

但往往，细节决定成败，对于 PCR 实验来说，也是如此。

小 E 呕心沥血，总结了以下几个细节，掌握它，轻松提升 PCR 实验产量！

细节一：核酸浓度

众所周知，在 PCR 实验中，核酸浓度对实验结果有着重大的影响。而对于核酸浓度，我们可以使用分光光度计来测得。

大家应该都能够理解「过低浓度会造成 PCR 反应失败」，但你知道吗？其实「过高浓度也会导致 PCR 实验失败」，原因在于：

过高浓度的核酸会结合掉过多的镁离子（Mg²⁺），从而造成酶反应活性下降，而且过高的核酸浓度也意味着纯化过程中可能会带来更多酶反应抑制剂，这些状况都会导致 PCR 反应结果不理想。

小 E 温馨提醒：在进行 PCR 反应前，请务必使用分光光度计先来测定下模板的浓度哦～

细节二：PCR 体系配制过程

除了实验中的核酸浓度，PCR 体系的配制过程是否统一也会对 PCR 实验结果造成重大影响。

当我们进行大量样品扩增时，请尽量采用较大（足够容下所有 mastermix）的容器来进行配制，并在配制完成后进行 mastermix 的分装，这是因为：如果我们使用多个容器去配制同一种 mastermix，那么不同容器中的 PCR 反应体系浓度会由于移液误差而不一致，这将会在很大程度上降低我们实验的重复性。

除此之外，在我们将配制好的 PCR 反应液分配到 PCR 管或者 PCR 板的过程中，移液误差也是不容忽视的。

小 E 温馨提醒：为了达到Z 好的分液效果，强烈建议大家使用分液器来进行这项操作。

分液器的优点不言而喻，不仅移液的重复性更高，而且具备一次分配多达 100 份液体的能力，能够有效帮助我们大幅度提升工作效率。

细节三：镁离子浓度

在 PCR 实验过程中，除了上述两个细节之外，还有一个细节非常容易被忽略，那就是镁离子浓度对 PCR 反应的影响。

镁离子在反应中与核酸骨架相互作用，并且能够影响聚合酶的活性。一般来说镁离子强度在 0.5-5mM 之间, 浓度过低会导致 PCR 产量过低甚至无法扩增，而浓度过高又会造成 PCR 反应特异性降低，扩增出我们不需要的非特异性条带。

小 E 温馨提醒：虽然目前一般市售试剂盒中都含有镁离子成分，但是当我们做扩增不顺利的时候，也可以酌情考虑是否是因为镁离子浓度不合适导致的。

细节四：变性温度

如果你是 PCR 技术达人，一定了解 Eppendorf 发明的 PCR 梯度技术的重要性，也一定知道在退火步骤中需要进行温度梯度的优化。小 E 要讲到的第四个细节，便和梯度技术息息相关，其实，需要优化的不仅是退火温度，还有变性温度。

变性温度的长短对 PCR 整个过程中的酶活性有着一定的影响，通过优化变性温度，我们可以近一步提升 PCR 反应的产量。

小 E 温馨提醒：传统的 PCR 仪，如果同时优化变性和退火温度，操作便会过于繁琐，而这也在客观上造成了，许多人往往只优化退火这一步而忽视了同样重要的变性温度。

由 Eppendorf 推出的 2D 梯度功能，历史性的改变了这一尴尬局面，能够同时优化变性和退火温度，操作更简便，提升 PCR 反应产量，更易如反掌！

如果你对以上的 PCR 知识都了如指掌，如数家珍，并且对自己的 PCR 知识储备量足够自信，那么，就来参加我们的 PCR 知识大挑战吧，不仅能“一战成名”，更有好礼相送！

开始答题

1. PCR 技术是由谁在 1980 年代发明的？（单选）

A. James Watson

B. Kary Mullis

C. Albert Einstein

D. Issac Newton

2. 理论上说 PCR 反应每经过一个循环会增加多少目标 DNA 序列？（单选）

A. 1 倍

B. 3 倍

C. 5 倍

D. 是一个随机数

3. 早期的 PCR 加热采用的是何种方式？（单选）

A. 水浴

B. 电磁炉

C. 半导体片

D. 加热丝

4. 以下哪些是 Eppendorf 发明的 PCR 相关技术？（多选）

A. 半导体温控技术

B. 梯度技术

C. steadyslop 技术

D. 2D 梯度技术

5. 以下哪些场景会应用到定性 PCR？（多选）

A. 疾病检测

B. 转基因研究

C. 亲子鉴定

D. 作物育种

6. 定性 PCR 仪在二代测序流程中用于？（多选）

A. 温控孵育

B. 低温保存样品

C. 核酸扩增

D. 样品浓度分析

活动规则：

即日起，按照出题顺序在评论区回复你的答案。

▲ Z先全部答对的第 1-5 人将获得 Eppendorf 定制版情怀游戏机充电宝

▲ 全部答对的第 6-15 人将获得 Eppendorf 定制版蓝牙鼠标

▲ 全部答对的第 16-30 人将获得 Eppendorf 定制版移液器笔

*以上排名以后台留言时间为准

小 E 将在收集到 30 份满分答卷后公开留言

PS：如果你对以上问题并不是太了解，不知道正确答案，小 E 还有锦囊妙计相送，快到宝藏视频里寻找答案吧！

期待大家的参与哟～