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　　实验小课堂：影响ELISA试剂盒实验的因素

　　一、试剂盒

　　1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;

　　2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。

　　二、试验仪器

　　1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;

　　2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。

　　三、操作

　　1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;

　　2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;

　　3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;

　　4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;

　　5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

　　注：以上资料仅供参考。

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