畜禽血清中AFB1生物标志物的测定—高效液相色谱法(征求意见稿)
安徽省质量技术监督局《关于下达2018年第一批安徽省地方标准制修订计划的函》(皖质函〔2018〕326号)的要求，由安徽农业大学等单位编制的省地方标准《畜禽血清中AFB1生物标记物的测定—高效液相色谱法(征求意见稿)》已完成了起草，现征求各有关单位、专家意见，请提出修改意见，并于2020年9月17日前填写《安徽省地方标准征求意见表》电子版反馈至安徽农业大学，逾期不反馈，视为无意见。E-mail: wangxichun@ahau.edu.cn
更多详情，请登录安徽省市场监督管理局官方网站查询。
节选该标准部分内容：
本标准规定了畜禽血清中黄曲霉毒素B1(AFB1)生物标志物高效液相色谱法测定的原理、试剂和设备、分析步骤、分析结果的表述、重复性、检出限与定量限、回收率。本标准适用于畜禽血清中AFB1生物标志物的测定。
规范性引用文件：《GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法》。
原理
通过蛋白酶的消化作用，从血清白蛋白中释放出AFB1生物标志物(AFB1-Lysine)，并采用固相萃取柱进一步浓缩。浓缩的AFB1生物标志物经高效液相色谱仪进行分离，在激发波长为405 nm和发射波长470 nm的荧光检测器中检测。
试剂
甲醇(CH3OH)：色谱纯。
磷酸二氢铵(NH4H2PO4)。
叠氮化钠(NaN3)。
白蛋白试剂(DMA)。
蛋白检测染料试剂浓缩液(考马斯亮蓝G-250)。
氯化钠(NaCl)。
磷酸氢二钠(Na2HPO4)。
磷酸二氢钾(KH2PO4)。
氢氧化铵((NH4OH)。
甲酸(HCOOH)。
设备
高效液相色谱仪，带荧光检测器。
固相萃取柱。
粒径5 µm C18高效液相色谱柱(250 × 4.6 mm)。
涡旋振荡器。
微量进样器。
天平：感量0.0001 g。
pH计。
超低温冰箱。
离心机：转速≥4000 r/min。
血清总蛋白浓度测定
4 ℃下取1 mg/mL蛋白标准品置于玻璃管中用于制备标准曲线，各管添加量见表 1;取待测血清5 μL至离心管中，加入95 μL水稀释样品，涡旋混合均匀，然后将4 μL稀释样品转移到预先添加796 μL色谱级用水的玻璃管中;向所有管中加入200 μL考马斯亮蓝G-250，室温下涡旋，混合均匀转移至待测试管中;以试管1作为空白，在595 nm的紫外波长下，使用分光光度计进行测量;记录标准品和样品的吸光度读数，根据标准吸光度制作标准曲线，由公式计算可得总蛋白浓度。
检出限与定量限
本方法中血清AFB1生物标志物的最低检出限为0.02 ng/mL，定量限为1.0 ng/mL。
回收率
添加浓度在0.5 ng/mL~1.0 ng/mL时，回收率在75~94 %之间。
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