基因扩增仪具体的使用方法
基因循环仪实际上相当于一个高效的温度控制系统,可以在短时间内高效切换PCR酶反应所需的温度:能够快速切换和调节温度对于PCR反应来说非常重要,如下:小编讲解PCR放大器的使用方法,附相关英文操作说明:
1、手动/机器人水浴基因扩增如上图所示。 使用三个恒温水浴,使三个水浴的温度恒定在三个温度:PCR的高温变性温度(如94℃)、低温复性温度(如58℃) ,以及适当的延伸温度(如72°C)。
然后用装有PCR标本管的篮子手动将其依次放入不同温度的水浴中。 使用秒表来计时样品在每个水浴中保持恒温的时间。
该方法的特点是:实验人员劳动强度高,容易因疲劳而产生误差; 其优点是:设备简单,投资少。 与自动化基因循环仪相比,无需加热和冷却过程,实验时间短,测试接近理想的PCR反应条件。
事实证明,实验结果是好的,但由于样品试管从一个水浴移至另一个水浴时短暂暴露在空气中,如果移动速度不够快,就会对样品造成温度干扰,影响结果。
2、定性基因扩增仪自动控制
与上述水浴扩增仪相比,也有人将此类扩增仪称为干式基因扩增仪。 是一款具有代表性的放大仪器,包括后来推出的第三代和第四代。 在第二代的基础上,集成了定量检测部分。
3. 终点定量/半定量
第二代定性PCR只能判断阴性和阳性,而不能评价特定核酸的浓度和定量分析。 定量PCR至少可以实现定性PCR无法实现的以下功能: 检测潜伏期病毒浓度 b. 感染程度 C.发病机制 确定病原体数量变化 de 评价抗病药物疗效。恢复期病毒载量检测
4..实时定量PCR
实时定量QPCR仪+实时荧光定量试剂+通用计算机+自动分析软件构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
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