使用PCR仪已成为一种潮流
现在,快速PCR已成为一种潮流。反应时间从90分钟缩短到30分钟,是受欢迎的,毕竟谁也不想在预约PCR仪时排队等太久。温度循环是所有PCR的基础。仪器的变温速率将决定PCR运行的整体速度。毫无疑问,变温越快,PCR运行也越快。宣传资料往往也会先展示高变温速率以暗示PCR仪运行速度快。因此,在拿到参数表时,我们时间会留意变温速率,也就是升降温速率。
不过,如果大家留心看,通常会发现ramp rate前面还会有一个Max,这说明制造商公布的是大变温速率。大模块变温速率(maximum block ramp rate)表示模块变温速率的限峰值。在PCR运行过程中,上述大性能只在短的时间内可达到,那种掐着秒表来计算变温速率的方法是不可取的。因此有诚意的制造商还会公布平均模块变温速率(average block ramp rate),表示在较长的变温范围内温度变化的速率。这个参数没那么炫目,但具参考意义,具有比较价值。
当然,样品的变温速率可没有模块那么高。这就好比在炉子上烧水,炉子很快就达到100ºC以上,但水可能只有50ºC。模块的热量传递到样品还需要一定的滞后时间。因此,只根据模块温度编程而不考虑样品体积的变温速率并不能算准确。
Applied Biosystems在这一点上就很周道,提供了另一种参数,平均样本变温速率(average sample ramp rate)或者大样品变温速率(maximum sample ramp rate)。这个参数能反应仪器根据体积来控制样品达到设置温度、遵循预设的实验方案运行的真实能力,有效地评估PCR仪的真实性能。
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