细胞内还原型谷胱甘肽（（GSH）的测定

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【导读】(一)原理细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)可保护细胞免受损伤，药物或毒物可通过使细胞内GSH耗竭而导致细胞受损。(二)材料1.96孔培养板培养的待测细胞与对照组细胞。2．O．1mo...

(一)原理

细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)可保护细胞免受损伤，药物或毒物可通过使细胞内GSH耗竭而导致细胞受损。

(二)材料

1.96孔培养板培养的待测细胞与对照组细胞。

2．O．1mol／LPBS(pH8．0)0．1mol／LNa2HPO4溶液170ml和O．1mol／LNaH2PO4溶液34ml混匀。

3．DTNB溶液用0．1mol／LPBS配成6．5％TCA溶液。

(三)方法

培养细胞的96孔培养板，倾去培养液，加入O．1mol／LPBS洗涤各孔，倒掉PRS，加入6．5％TCA0．05ml，4℃放置30min，再加入0．25ml的DTNB溶液，10min后在420nm处比色。

(四)结果

可计算受试物组细胞GSH的相对含量(％)

细胞GSH的相对含量越高，则细胞毒性越低；细胞GSH的相对含量越低，则细胞毒性越高。也可计算细胞GSH的含量，但要先绘制GSH的标准曲线，方法类似于蛋白质标准曲线。

(五)注意事项

若细胞在24孔培养板或6孔培养板上培养，可将细胞刮下来，经超声破碎或用溶解液溶解，再测定GSH量，但在96孔培养板上培养则不必刮细胞，可直接经6．5％TCA提取GSH，直接比色。

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2004-09-17 09:23:05

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