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- 【导读】(一)原理细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)可保护细胞免受损伤,药物或毒物可通过使细胞内GSH耗竭而导致细胞受损。(二)材料1.96孔培养板培养的待测细胞与对照组细胞。2.O.1mo...
(一)原理
细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)可保护细胞免受损伤,药物或毒物可通过使细胞内GSH耗竭而导致细胞受损。
(二)材料
1.96孔培养板培养的待测细胞与对照组细胞。
2.O.1mol/LPBS(pH8.0)0.1mol/LNa2HPO4溶液170ml和O.1mol/LNaH2PO4溶液34ml混匀。
3.DTNB溶液用0.1mol/LPBS配成6.5%TCA溶液。
(三)方法
培养细胞的96孔培养板,倾去培养液,加入O.1mol/LPBS洗涤各孔,倒掉PRS,加入6.5%TCA0.05ml,4℃放置30min,再加入0.25ml的DTNB溶液,10min后在420nm处比色。
(四)结果
可计算受试物组细胞GSH的相对含量(%)
细胞GSH的相对含量越高,则细胞毒性越低;细胞GSH的相对含量越低,则细胞毒性越高。也可计算细胞GSH的含量,但要先绘制GSH的标准曲线,方法类似于蛋白质标准曲线。
(五)注意事项
若细胞在24孔培养板或6孔培养板上培养,可将细胞刮下来,经超声破碎或用溶解液溶解,再测定GSH量,但在96孔培养板上培养则不必刮细胞,可直接经6.5%TCA提取GSH,直接比色。
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- 2004-09-17 09:23:05
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