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- 【导读】介绍一种。背景:目前外源质粒转化大肠杆菌的步骤,需要先将质粒和感受态细胞在冰上抚育半小时,然后42度热激90秒,加液体培养基缓摇1个小时左右再离心涂板。其中热激步骤温度和时间要求严...
介绍一种。
背景:目前外源质粒转化大肠杆菌的步骤,需要先将质粒和感受态细胞在冰上抚育半小时,然后42度热激90秒,加液体培养基缓摇1个小时左右再离心涂板。其中热激步骤温度和时间要求严格,热激后大量菌细胞死亡,还要经过液体培养基抚育才能涂板。
方法改进:我们可以在做质粒和感受态细胞在冰上抚育的同时,将要涂的平板放在37度培养箱里,当抚育结束后,立即涂到已经加热到37度的平板上,利用培养板的热度代替热激,平板可以直接放回培养箱倒置培养。由于温度相对温和,细胞死亡的少,之后的液体培养基抚育过程也省掉了。
这个方法我们一直在用,质粒可以成功转进菌体中,只要感受态细胞没有问题,其转化率和使用热激法差不多,而且若是新鲜制备的感受态细胞,转化率甚至更高。可以省下42度水浴装置的仪器,还节省了至少1个小时的时间。
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