大肠杆菌转化时免热激及孵育的方法

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【导读】中山大学的徐晓鹏博士向大家介绍了一种质粒转化大肠杆菌时免热激及孵育的方法。背景：目前外源质粒转化大肠杆菌的步骤，需要先将质粒和感受态细胞在冰上抚育半小时，然后42度热激90秒，加液...

中山大学的徐晓鹏博士向大家介绍了一种质粒转化大肠杆菌时免热激及孵育的方法。

背景：目前外源质粒转化大肠杆菌的步骤，需要先将质粒和感受态细胞在冰上抚育半小时，然后42度热激90秒，加液体培养基缓摇1个小时左右再离心涂板。其中热激步骤温度和时间要求严格，热激后大量菌细胞死亡，还要经过液体培养基抚育才能涂板。

方法改进：我们可以在做质粒和感受态细胞在冰上抚育的同时，将要涂的平板放在37度培养箱里，当抚育结束后，立即涂到已经加热到37度的平板上，利用培养板的热度代替热激，平板可以直接放回培养箱倒置培养。由于温度相对温和，细胞死亡的少，之后的液体培养基抚育过程也省掉了。

这个方法我们一直在用，质粒可以成功转进菌体中，只要感受态细胞没有问题，其转化率和使用热激法差不多，而且若是新鲜制备的感受态细胞，转化率甚至更高。可以省下42度水浴装置的仪器，还节省了至少1个小时的时间。

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2004-08-30 09:23:16

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