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上海长方光学仪器有限公司

葡聚糖凝胶使用方法

来源:内容来源于网络 浏览量:443次
【导读】1乙醇浸泡在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干。2无盐水浸泡室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保...

1乙醇浸泡

在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干。

2无盐水浸泡

室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀。

3盐酸浸泡

在常温下再用0.1MHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性。

4装柱

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层。

5平衡

上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

6上样

凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可。

7洗脱方法

可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。

8清洗

每次用完之后,将柱子里的缓冲液置换为去离子水,然后用20%的乙醇封存。

9在位清洗(CIP)

凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。


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2004-10-26 09:23:03
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