羟基磷灰石填料-分离机理

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【导读】羟基磷灰石填料——纯化蛋白、多肽、核酸分离机理：羟基磷灰石具有独特的分离机理，是唯一直接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析填料，高度耐碱，生物安全性最高。其中磷酸离子与带正电...

羟基磷灰石填料

——纯化蛋白、多肽、核酸

分离机理：羟基磷灰石具有独特的分离机理，是唯yi直接用于蛋白质和核酸纯化的无机层析填料，高度耐碱，生物安全性Zgao。其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子键结合，具有离子交换特性，可由NaCl浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱，其中的Ca2＋离子与带负电蛋白质的自由羧基以金属螯合方式结合，该结合方式对NaCl不敏感，可由磷酸钠浓度梯度洗脱。因此该填料既可以用磷酸钠单梯度洗脱，也可以采用NaCl梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液平衡，再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型，以达到更高的分辨率。

羟基磷灰石类型选择：羟基磷灰石因陶瓷化工艺不同分为2种类型：I型和II型，I型对蛋白质具有更大的保留，对普通蛋白质具有更大的动态载量，主要纯化大部分蛋白质（分子量一般在100kd一下）；II型由于孔径较I型大，因而对抗体和部分重组疫苗等大分子量蛋白质的动态载量更高，而对HSA几乎无保留，因而更适合于抗体的纯化，同时II型对核酸具有更大的保留，能够分辩单、双链、超螺旋等各种高级结构的DNA，因而也适合纯化核酸。

●高动态载量、高流速、高产率

●更好的化学稳定性和机械强度，更长的寿命

●刚性结构，保证了其在PH>6.5的范围内使用，可用NaOH清洗

●良好的批次重现性，容易放大化

●可随意选用阳离子和金属螯合两个模式分离纯化蛋白或其他分子

●能用于层析系统、重力流柱、AcroPrep多孔板等

应用

●碱性蛋白的纯化（免疫球蛋白）

●抗体纯化

●酸性蛋白（白蛋白）

●去除DNA和内毒素

●纯化磷多肽

●分离纯化复杂的蛋白混合物

●纯化质粒

流动相：平衡液：5mM的磷酸钠缓冲液，PH=6.8

洗脱液：0.5M的磷酸钠缓冲液，或2M的氯化钠缓冲液，PH=6.8

使用步骤：建议使用干法填柱

2004-07-19 09:04:13

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