多克隆抗体制备|实验技术服务

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pCzn1质粒+ArcticExpress宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程：
多克隆抗体的制备步骤
1)家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。
2)沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌（小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血）。
3)用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织。
4)于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。
5)用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口（勿剪断），插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。
6)松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
3.血清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr，转移到4oC沉淀，第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集，37oC烘箱放置2hr，转移到4oC沉淀，第二天早上离心，10000RCF，10分钟。在血清中加入NaN3至终浓度0.02%，分装后-20oC保存
抗血清收获后，加1/万硫柳汞或1/万的叠氮钠防腐，或加入等量的中性甘油，分装小瓶，置-20℃以下的低温保存，数月至数年内抗体效价无明显变化。注意避免反复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
(一)抗原制备
Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，
经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备
抗Ig抗体。
(二)材料与试剂
1.提取的动物Ig
2.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
3.青霉素和链霉素
4.实验动物兔
5.其它材料及试剂

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