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- 【导读】绵羊免疫球蛋白A(IgA)试剂盒本试剂盒用于测定绵羊血清,血浆及相关液体样本中免疫球蛋白A(IgA)的含量。操作步骤:1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一...
绵羊免疫球蛋白A(IgA)试剂盒
本试剂盒用于测定绵羊血清,血浆及相关液体样本中免疫球蛋白A(IgA)的含量。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在diyi、第二孔中分别加标准品100μl,然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从diyi孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为90μg/ml,60μg/ml,30μg/ml,15μg/ml,7.5μg/ml)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
SheepImmunoglobulinA(IgA)ELISAKit
ThiskitallowsforthedeterminationofIgAconcentrationsinSheepserum,bloodplasma,andotherbiologicalfluids.
Assayprocedure
1.DiluteandaddsampletoStandard:set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100μltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50μltothefirstandthesecondwell,mix;takeout100μlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50μltothethirdandtheforthwell,mix;thentakeout50μlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50μltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50μltothefifthandthesixthwell,mix;takeout50μlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50μltotheseventhandtheeighthwell,mix;takeout50μlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50μltotheninthandthetenthwell,mix,takeout50μlfromtheninthandthetenthwelldiscard(addSample50μltoeachwellafterDiluting,(density:90μg/ml,60μg/ml,30μg/ml,15μg/ml,7.5μg/ml)
2.addsample:Setblankwellsseparately(blankcomparisonwellsdon’taddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame).testingsamplewell.addSampledilution40μltotestingsamplewell,thenaddtestingsample10μl(samplefinaldilutionis5-fold),addsampletowells,don’ttouchthewellwallasfaraspossible,andGentlymix.
3.Incubate:AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30minat37℃.
4.Configurateliquid:30-fold(or20-fold)washsolutiondiluted30-fold(or20-fold)withdistilledwaterandreserve.
5.washing:UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.
6.addenzyme:AddHRP-Conjugatereagent50μltoeachwell,exceptblankwell.
7.incubate:Operationwith3.
8.washing:Operationwith5.
9.color:AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat37℃
10.Stopthereaction:AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction(thebluecolorchangetoyellowcolor).
11.assay:takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.
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- 2004-11-27 09:40:25
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