- 可恶!知识不受控制的进入了我的大脑!
- Dr.赛流式小课堂 | 轻松上手流式染色细胞因子实验
- 小道快讯 | 交付中心技能PK大赛奖项花落谁家
- MP工具箱 | 云学堂:一键开启免费学习平台
- 媒体报道丨国产仪器如何跑赢存量市场?
- 东隆科技诚邀您共赴CIOE 2024深圳光博会,见证光电技术革新!
- 滨松:行“专业公司”应行之事
- 参会指南 | 第一届微纳塑料检测及其标准化学术研讨会
- 8月节日 | 为猫咪、狗狗和流浪动物送上专属礼物
- 实验室磷酸根分析仪有效检测磷酸根含量高低
- Aiculture|探索微生物世界:平板计数琼脂的实用指南
- 火力发电|教科书里的奥立龙在线钠表
- 啤酒色度仪如何检测啤酒色度值?
![上海长方光学仪器有限公司](http://yiqi-oss.oss-cn-hangzhou.aliyuncs.com/aliyun/Manage/2018-07-06/20180706-2055212137.jpg)
- 来源:内容来源于网络 浏览量:814次
- 【导读】免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)...
免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry),也是国内应用比较广泛的一种方法,这个实验的成败有两个比较关键的因素,样本的处理和抗体的选择,今天上海劲马就为您介绍一下怎样处理免疫组化样本的处理和抗体的选择,今天就让上海恒远与您一起分享一下怎样处理免疫组化的样本。
对于ICC实验,在开始染色步骤之前,细胞必须附着在显微镜载玻片或盖玻片上。样本制备也与固定方法密切相关,而固定方法又会受到检测技术(荧光vs显色)的影响。
在大部分情况下,某个实验变量将决定样本制备的Z合适方法。例如,浸润固定在甲醛中的组织必须石蜡包埋,并利用切片机切片。或者,为了检测磷酸化依赖的表位,组织可能需要快速冷冻,因此在醇类固定之后就需要一个低温箱来进行样本切片。
石蜡包埋的组织
石蜡包埋为长期保存组织样本提供了合适选择。组织在用石蜡包埋之前必须固定。固定可通过灌注或解剖后立即浸润来实现,一般需要4-24小时。不建议固定组织24小时以上,因为固定过度可能导致抗原的遮蔽。如有必要,组织在固定后可转移至酒精中,直至包埋过程。
因为石蜡与水是不混溶的,所以组织在加入熔化的固体石蜡前必须脱水。脱水是通过浸润在浓度递增的酒精中而实现的。这种方法逐步改变疏水性,让细胞伤害Z小化。脱水之后,组织与二甲苯共同孵育,以去除任何残留的酒精。石蜡一般加热到60?C进行包埋,随后经过一夜硬化。之后利用切片机用锋利的刀片将组织切成超薄的切片。切片在显微镜载玻片上干燥,并长时间室温储存。组织切片在开始IHC/ICC步骤之前必须再水化。石蜡是组织包埋的Z便宜也是Z常用的物质。不过,组织也可包埋在塑料中,凝固得更硬,并切成更薄的组织切片(1.5μmvs5μm)。
冰冻组织
冰冻组织样本的好处之一是省去了石蜡包埋组织Z初所需的固定步骤。在检测翻译后修饰如磷酸化时,快速冷冻特别有益。冰冻组织的制备可将组织浸润在液氮或异戊烷中,或埋在干冰里。对于冰冻组织,在冷冻和切片之后进行一个短时间的固定。冰冻组织切片Z常用醇类固定,这避免了修复甲醛交联所遮蔽的表位的需要。冰冻组织在低温箱中切片,切片在-80?C可储存多达1年。
冰冻组织切片的处理时间比石蜡包埋切片要短一些。不过,冷冻对于组织的长期保存是不够的,且细胞内冰晶的形成可能会负面影响亚细胞的细节。此外,冰冻切片通常比石蜡切片厚。这可能导致较低的显微镜分辨率以及差的组织形态学图像。因为冰冻切片通常保留酶的活性,所以封闭可能影响IHC检测的内源酶的活性也是特别重要的。
细胞样本在开展ICC研究时,首先必须将细胞附着在固体支持物上,如显微镜载玻片或盖玻片。这对于贴壁细胞很简单,它们可直接放置在6孔或24孔板底部的高级无菌盖玻片上生长。将盖玻片预包被一层带电荷的聚合物(如多聚赖氨酸)和/或细胞外基质蛋白(如层粘连蛋白、纤维粘连蛋白或胶原),可增强细胞附着。染色过程的所有步骤可在微孔板内的盖玻片上开展,向每个孔中加入适当的溶液并移走溶液。悬浮细胞可通过Cytospin?离心或与包被多聚赖氨酸的玻片孵育10分钟而附着在玻片上。
上海恒远是一家有着多年生产和销售免疫组化试剂盒的公司,我们所有的免疫组化试剂盒都是保证质量保证实验效果的,并提供售后服务除此之外上海恒远生物有限公司大量供应ELISA试剂盒(RDELISAKit Omega ELISAKit),抗体(兔单抗、鼠单抗、分装抗体、免疫组化抗体、二抗、标签抗体),细胞(ATCC原代细胞、培养基、正常细胞、肿瘤细胞),生化试剂(氨基酸、缓冲剂、分离试剂、培养基、蛋白质、酶、生化酶及辅酶、核酸及其衍生物、碳水化和物、抗生素、染色剂、维生素试剂),品牌有Amresco和Sigma等欢迎新老客户来电咨询。
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-11-29 09:23:22
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
-
随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
如何制备液态奶样品? Megazyme 酶法食品检测试剂盒 FAQs (302004-08-20 09:23:04
Megazyme酶法食品检测试剂盒FAQs(30)Q:如何制备液态奶样品?A:液态奶样品推荐按如下过程制备。
-
激光粒度仪在制备样品的过程中需要用到哪些物品2004-07-26 09:12:04
激光粒度仪是用来检测各种金属以及非金属的粉末粒度的仪器,集光、机、电、计算机为一体的高科技产品确保检测的准确
-
使用Megazyme食品检测试剂盒检测固体样品结果如何计算? Megazym2004-08-20 09:23:04
Megazyme酶法食品检测试剂盒FAQs(9)Q:固体样品的结果如何计算?A:固体样品的结果是按照g/10
-
H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的如何制备及ELISA诊断方法的建立2004-09-07 09:23:12
研究采用高致病性禽流感病毒(Highlypathogenicavianinfluenzavirus,HPAI
-
实验秘籍:如何制备颗粒性抗原?2005-02-16 09:23:06
颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。今天上海沪鼎对这两种抗原的制备方法进行了整理,下面分享给大家!绵羊红细
-
如何制备蒸发残渣<1mg/L的化验室纯水?2004-08-03 09:01:54
我们:实验室水务专家(Labwater.com.cn)是一群热情并专注于纯水相关业务的人,无论纯水设备、纯
-
如何制备二氧化硅含量分析化验用的二氧化硅空白水?2004-08-31 09:23:07
高压锅炉供水系统采用一级复床+混床的工艺,高压锅炉给水泵的出口水质如下:pH电导率SiO2(μg/L)7.4
-
企业化验室如何制备蒸发残渣<1mg/L的纯水?2004-08-31 09:23:07
我们:实验室水务专家(Labwater.com.cn)是一群热情并专注于纯水相关业务的人,无论纯水设备、纯水
-
如何制备枯草杆菌细胞固定化2004-09-26 09:23:04
人原代细胞枯草杆菌细胞固定化操作方法1、取枯草杆菌湿细胞2g,悬浮在10ml海藻酸钠溶液中混合均匀。2、用注
-
盐雾试验箱样品应该如何放置2004-12-05 09:23:05
盐雾试验箱是一款环境综合检测类试验设备,巨为仪器股份有限公司采用进口PVC板材和亚克力板材精心制造,质量可靠
如何制备免疫组化的样品
-
您可能感兴趣
![](https://static.yiqi.com/Pingce/img/imgddd.png)
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi