ELISA试剂盒实验常见问题解决方案汇总

ELISA试剂盒实验因其灵敏度较高、特异性较好而广泛应用于临床上，但操作中的各环节对检测效果影响较大，稍不注意，就有可能导致显色不全、花板。

问题主要集中在这几个方面：选材、加样、孵育、洗板、显色、终止、读板。问题及解决方案具体解析如下：

选材

选择质量优良的检测试剂，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

加样

出现问题可能原因

1.血清或血浆标本分离不好即进行加样。

2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）。

3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

解决方案

1.标本为血清：Z好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

2.加样后及时放入孵箱。

3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自动加样，Z好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

5.标本较多时，请分批操作。

孵育

出现问题可能原因

1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底。

2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

解决方案

1.贴封片或加盖；

2.按说明步骤严格控制操作时间。

洗板

出现问题可能原因

1.采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。

2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。

3.反应板过多造成洗板等待时间长。

解决方案

1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后Z好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干。

2.合理安排，或多用几台洗板机。

显色

出现问题可能原因

1.显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂。

2.加显色剂时溅出孔外造成液体回流。

解决方案

1.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

2.加样时保持显色剂不外流。

3.A、B液应避免接触金属器械。

终止

出现问题可能原因

加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。

解决方案

加终止液时应避免产生气泡。

读板

出现问题可能原因

读板时板底不清洁。

解决方案

应保证酶标板清洁。

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