Hoechst染色方法实验步骤

Hoechst染色方法实验步骤
1．贴壁细胞

1）取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

2）刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

3）去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。

4）加入0.5mlHoechst33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。

5）用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

6）滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。

7）荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

2.悬浮细胞

1）离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

2）离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。

3）Z后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

4）稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

5）均匀滴上0.5mlHoechst33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。

6）用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

7）滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

8）H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

3.组织切片

1）常规包埋切片后，脱蜡，透明。

2）PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。

3）加入0.5mlHoechst33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动。

4）用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

5）将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

6）荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

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