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- 【导读】实验步骤1.贴壁细胞1)取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于...
实验步骤1.贴壁细胞
1)取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过一夜,使约为50%-80%满。
2)刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过一夜)。
3)去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。
4)加入0.5mlHoechst33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。
5)用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。
6)滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。
7)荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
2.悬浮细胞
1)离心收集细胞样品于1.5ml离心管内,加入0.5ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过一夜)。
2)离心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
3)Z后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。
4)稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5)均匀滴上0.5mlHoechst33258染色液,染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
6)用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。
7)滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
8)H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
3.组织切片
1)常规包埋切片后,脱蜡,透明。
2)PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
3)加入0.5mlHoechst33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动。
4)用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。
5)将切片置于载玻片上,滴一滴抗淬灭封片液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
6)荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
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- 2004-09-11 09:23:05
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