- 相约杭州|安谱实验邀请您共赴 检测企业整合实践创新大会暨TIC私董会八周年年会
- 《白露惊秋!从候鸟迁徙到普仁仪器的神奇助力》
- 【今日白露】露从今夜白,夜自此日凉
- 展会回顾|指尖上的仪器“贵阳”人生初见暨广州市仪器行业协会贵阳行
- 白露时节|水上的安全守护
- CRISPR/Cas9诺奖得主携手荧光技术共探生命奥秘|前沿应用
- 解锁氧氮氢养护技巧,掌握拉曼样品准备妙招——9月12日 HORIBA 售后服务直播间精彩来袭!
- 鲲霆十年,一路相伴丨十周年庆福利活动第一弹
- 来源:内容来源于网络 浏览量:528次
- 【导读】ELISA实验常见问题分析异常结果描述原因分析对策白板显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所...
ELISA实验常见问题分析
异常
结果描述
原因分析
对策
白板
显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。
试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用
检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。
错加、漏加试剂底物、显色剂A或B
严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象。
洗板及加样过程中,酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力
确认盛酶标的容器不含酶YZ剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净。
终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制
每次配制时都应看清标签标明物质
蒸馏水有问题
确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染,与好蒸馏水比较。
显色弱、灵敏度低
实验结束后,包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。
试剂盒超过期,超过有效期的产品可能会产生很弱的信号;试剂盒没有按规定进行保存,受高温影响;
实验前检查试剂的组分及批号,确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下,按使用规定储藏。
试剂、样品用前未平衡至室温
从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡20分钟左右。
加入试剂的体积和时间有误,移液器计量不准,吸嘴内水分太多或不清洁;
确定所使用的试剂体积正确,加入时间适当。校正移液器,移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快,排放应完全。
洗板及加样过程中,酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力
确认盛酶标的容器不含酶YZ剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净,确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。
孵育时间及孵育温度未达到要求,反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。
孵育温度应控制在37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门,以免影响保温。
洗板次数过多,或浓缩洗液稀释倍数不符合要求;洗涤冲击力太大。浸泡时间太长;
严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板,减小洗涤冲击力,按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数。
显色剂加量不足或顺序颠倒,或混合后加入;
显色剂滴瓶垂直向下,持力均匀,滴速不宜过快,先加显色剂A,后加显色剂B,不可将A、B液混合后加入
底物作用时间不够;
准确定时。
蒸馏水水质有问题;
测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响。
实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但临床标本感觉显色较弱
待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的
如有怀疑,可复检
标本加入叠氮钠作为防腐剂
酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用proclin、硫柳汞等其他防腐剂
阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。
未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本,但质控或弱阳性标本受温度变化影响较大而被未检出
质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的,可存于2-8℃,如需长期保存,应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装,并置于-20℃以下保存。
质控品或标本高温放置过久,或被反复冻融致待测物滴度下降,而未能检出
重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配。
仪器设定不正确,滤光片不匹配
重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配
灵敏度过高、板底高、高背景
终止后,整板结果显现均一的黄色或淡黄色;或阴阳性对照、质控正常,标本阴性标本OD值过高。
整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成,如同时操作两对半试剂时,测HbsAb板用于测HBsAg等;
实验前检查试剂的组分及批号,确认所有组分均属于对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象;
避免试剂组分间的交叉污染,确保吸头、容器的干净
显色剂在光照条件下放置过久,实验前已变蓝
显色剂A、B未使用前避光保存
孵育温度过高或孵育时间过长;
孵育温度应控制在37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。
未按要求洗板。特别是洗涤时每孔未注满洗液,易造成花板黄板现象
严格按说明书要求洗板
花板,一般是由于临床标本的收集、处理和保存方法不当造成
放置时间(自然放置1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意。
出现随机性的花板、跳孔现象
样品离心不完全,反应孔内发生凝血或残留细胞成分;
充分离心,3000rpm6分钟以上。
加样时交叉污染;
加标本时尽量避免交叉污染。如盛标本的试管周围常有血痂,易脱落,应远离酶标板。
手工洗板造成的交叉污染
手工洗板时前3次注洗液后应立即弃去,后几次再设定浸泡时间,可减少交叉污染
洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大,造成花板、跳孔
疏通加液头,使洗板时每孔均注满洗液,吸液时残留量要小。
拍板时交叉污染
洗板完毕拍板时用合适的吸水纸巾,不要把无关物质拍进板孔,并尽量不要在同位置拍,以免交叉污染。
假阳性
假阳性现象是一个综合现象,可参考上文“灵敏度过高、板底高、高背景”中的分析。这里只列举常见的原因及对策。
计算Cutoff值时使用的公式不正确,导致计算得出的CutOff值过低,从而导致出现假阳性
CutOff值计算公式应严格参照所属产品的说明书,应注意各个酶免产品的Cutoff值计算公式不尽相同
洗板时未能注满洗液或洗板次数、浸泡时间不够,洗涤不充分,样品中有其他成分残留导致花板、跳孔,假阳性增多
严格按说明书要求洗板。调整洗板机时,应注意有时仪器标示的液量与实际液量并不相符,应根据实际情况调整至每孔注满。
血清标本处理不当,如未除去细胞成分、纤维蛋白原及其它干扰物可出现孔底由变蓝的跳孔现象,此标本重复实验结果往往是阴性;
放置时间(自然放置1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意
厂家试剂质量的变化造成
国家标准要求提高灵敏度时,厂家试剂灵敏度也相应提高,假阳率常常有所上升,但只要在合理范围,是可以接受的
水质问题
防止蒸馏水污染
加酶量过多(如50uL误认为100uL)或丙肝酶稀释时加量过多
加酶前检查移液器调节量是否准确,稀释酶时思想要集中
培养箱温度超过37℃</
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-12-02 09:23:10
- 标签:
- 收藏(0) 赞({{input('id')|returnCommentsOptionCount=23,###,1}}) 踩({{input('id')|returnCommentsOptionCount=23,###,2}})
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
elisa试剂盒操作适合常见问题分析2004-09-07 09:23:11
ELISA试剂盒测定的主要原理是利用抗原、抗体之间的特异反应通过某一种或几种酶来连接待测物,通过底物和酶的相
-
ELISA试剂盒实验相关常见问题2004-12-08 09:23:05
1.产品有哪几种规格?可检测多少个样本?ELISA试剂盒产品分为48T和96T两种规格。每次实验的标准曲线一
-
ELISA试剂盒在实验中常见问题的详解2004-11-28 09:23:14
1质控血清的使用卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清,可以在-20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化使用
-
国产ELISA试剂盒在实验中常见问题的详解2004-12-02 09:23:12
1质控血清的使用卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清,可以在-20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化使用
-
酶联免疫Elisa试剂盒样本实验准备2005-01-27 09:23:08
酶联免疫Elisa试剂盒样本实验准备在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对
-
小鼠25羟维生素D3 ELISA试剂盒分析2006-07-22 13:12:04
小鼠25羟维生素D3 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅
-
ELISA实验常见问题解析2004-10-02 09:23:12
ELISA实验常见问题解析ELISA实验因灵敏度高,特异性强在生物科研上得到了广泛的认可,但对初学者而言,如
-
多元素分析仪的常见问题及建议2004-11-02 09:23:07
多元素分析仪的常见问题及建议河南平原光电有限公司是中国兵器工业集团公司以研制生产光机电一体化产品为主的军民结
-
梅特勒电子分析天平常见问题解答2004-11-27 09:41:31
梅特勒电子分析天平常见问题解答在使用电子分析天平的时候旺旺会出现各种问题,今天小编为您总结了一下适用梅特勒A
-
酶标分析仪的常见问题解读2007-05-21 13:37:44
酶标
ELISA试剂盒实验常见问题分析
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi