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上海沪鼎生物根据售后处理客户问题解答;结合技术部的实验探讨,特别针对细菌中提取分泌蛋白质有哪些方法做出解释,本次实验仅供参考依据,具体以实验标准为准。客户需要从细菌中提取一种可分泌至培养基上清的一种小分子多肽,按照文献的方法是取细菌上清后用氯仿抽提,可反复做过多次,蛋白总是没有活性,不知道各位同仁有没有什么好方法?请指教!
以下参考意见:参考一:
氯仿是有机溶剂,所以但没有活性。分离这种分泌性蛋白质,可以先将上清液透析,然后过柱。
参考二:
蛋白要保持活性,必须维持三维构象,而在有机溶剂处理的情况下,蛋白的三维构象被破坏,自然就没有活性了。
如果你的培养液是高盐浓度的,你可以在得到上清的可溶性蛋白后,加入5-10倍体积的复性液,以稀释盐浓度,防止在下一步透析过程中随着盐浓度的降低,造成蛋白析出沉淀而丧失活性,然后用透析袋进行透析,4度以防止蛋白降解,4-6小时,然后冷冻干燥,这样得到的蛋白就能保持活性了。
参考三:
你的蛋白链内有二硫键么?结构一般不会太复杂吧?除非有复杂的二硫键,这么小的蛋白,复性应该不是主要矛盾。
一些小蛋白如果在有机溶剂中发生的疏水结构的改变是可逆的,而且疏水性较强,那可能就可以用氯仿抽提,很容易和大部分蛋白分开,不过脂类和脂蛋白肯定去不掉。
但是能溶于氯仿,你的蛋白我怀疑很有可能一般的水相条件并不是很好溶,先确定一下这个问题,然后结合你的测活方法,看看是不是在测活的时候蛋白失活的。
参考四:
我的蛋白确实是在一般的水相条件不好溶,活性的检测方法没什么问题,
氯仿抽提后用6M的尿素溶解,加ddH2O倍比稀释后检测活性!这是文献上的方法,可总是没有活性。不知道是不是氯仿抽提的方法有问题?氯仿抽提法有没有什么要注意的地方?
参考五:
培养上清中没有尿素,可能蛋白浓度不高,但还是要确定一下蛋白能溶么?
或是直接纯化前取上清测活看看,到底是不是氯仿的问题。
参考六:
我所提的蛋白是不溶于水的,但是在6M、8M的尿素中是可容的
取上清做证实上清是有活性的,所以我觉得是尿素没有将我所需求的蛋白抽提出来,不知道是不是细节上出了些问题?各位,有没有更好的办法呢?
参考七:
是氯仿没有把我所需的蛋白抽提出来上海沪鼎是一家研究经销生化试剂的金牌dai理商,我司拥有一支雄厚的技术团队,为客户提供完善的售前售后服务,及真实的实验技术支持。您有任何问题均可来电咨询订购我司试剂盒。生物试剂等产品。
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- 2004-12-02 09:23:11
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