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- 【导读】细胞冻存好了,接下来要注意什么问题呢?没错,就是记得到时间了,拿出来复苏。那么,细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?今天就为大家一一解答。一、活力...
细胞冻存好了,接下来要注意什么问题呢?没错,就是记得到时间了,拿出来复苏。那么,细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?今天就为大家一一解答。
一、活力检查:千万不要使用不健康的细胞,可能有污染(真菌、支原体等),如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!
二、形态检查:检查细胞的固有形态和生长行为。
三、冻存细胞:
1.补充新的培养液:在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至70%单层时收获细胞,计数活细胞数,用冻存液调整细胞密度~5x106cells/ml(根据不同的细胞类型调整)
2.冻存液:用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞,有不同类型的冻存液,根据细胞类型选择Z合适的冻存液。
在冻存管上标记好细胞类型,日期,冻存人等信息,并保证每冻存管不超过1.5ml.。程序降温是保证冻存细胞活性的关键,使用Mr.Frosty(找生物注一种装置)保证降温速度为1°-3°C,置于-80°C冰箱内*夜,如果没有Mr.Frosty装置,可以使用实验室常见的泡沫盒、棉花等。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以Z快的速度转移冻存管知液氮罐内,因此,此步骤Z好使用干冰,或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意,在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息,做好记录是非常非常重要的!
四、细胞复苏:正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要,当从液氮罐内取出细胞时,有可能会出现冻存管破裂的情况,使用保护面罩和防护服十分必要。从液氮内转移冻存管至热的(温度高的)容器内,应在液氮内完成。应该与37℃水浴中快速溶解冻存的细胞,并保证冻存管盖子在水面之上以避免污染。当Z小的冰块溶解后,用70%酒精擦拭冻存管,并迅速转移至新的已经预热的培养基内。观察细胞生长形态和生长比率。
其实,细胞复苏只是一个简单的实验,不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节,不然,也不一定会尽如人意。例如说,人身健康方面:一定要记得做好防冻工作,戴上护目镜;尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。
如有其他不了解的相关方面,还可以直接拨打我公司客服热线,我们有专业技术人员为您解答,期待您的来电!
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- 2004-12-02 09:23:12
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