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上海长方光学仪器有限公司

植物组织蛋白质提取的方法

来源:内容来源于网络 浏览量:1069次
【导读】   蛋白质是一种复杂的有机化合物,旧称“朊"。蛋白质是由氨基酸分子呈线性排列所形成,相邻氨基酸残基的羧基和氨基通过肽键连接在一起。蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除...

  蛋白质是一种复杂的有机化合物,旧称“朊"。蛋白质是由氨基酸分子呈线性排列所形成,相邻氨基酸残基的羧基和氨基通过肽键连接在一起。蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除了遗传密码所编码的20种“标准"氨基酸,在蛋白质中,某些氨基酸残基还可以被翻译后修饰而发生化学结构的变化,从而对蛋白质进行激活或调控。蛋白质是生命的物质基础,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。因此,它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。

植物组织蛋白质提取方中三氯醋酸—丙酮沉淀法:

1、在液氮中研磨叶片.
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过*,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。

4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。三氯醋酸—丙酮沉淀法主要针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点,当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少。

  

2004-07-23 16:27:07
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