新型植物基因组 DNA 小量提取试剂盒

新型植物基因组DNA小量提取试剂盒

试剂盒组成成分请在线咨询；

试剂盒介绍：DNA纯化试剂盒提供一个快速有效的DNA纯化方案，广泛地应用于植物组织和真菌。100mg的植物鲜重组织或者20mg干重植物组织都可应用此DNA纯化试剂盒。DNA快速纯化试剂盒可以在1小时内提取植物总DNA（包括线粒体DNA、叶绿体DNA），提取的DNA可以直接用于PCR、Southernblotting等，整个纯化过程不需要酚，CHCl3等有毒试剂，这使得DNA纯化试剂盒很好的用于各种其他样品。纯化得到的DNA用低盐溶液或者水洗脱并应用于下游实验，纯化得到的DNAA260/A280值可达到1.7~1.9，这表明DNA纯度较高，且260nm吸收峰值较好。GX滤膜可以有效的去除一些YZ剂或者其他影响物质，可广泛应用于PCR、RAPD、AFLP、RFLP、SNP等下游实验。自备设备及耗材：1、高速离心机2、液氮3、漩涡振荡器4、EP管5、热水浴或者金属浴6、无水乙醇小量植物总DNA提取（MiniProtocol）1、如果您首次使用植物DNA提取试剂盒，请阅读以上重要注意事项。2、BufferPI-A颜色发黄时不影响正常使用，建议BufferPI-A使用前65℃预热。3、离心环境保持在室温状态（15~25℃）。

开始前准备：1、BufferPI-A使用前65℃加热，BufferPI-C中含有乙醇，使用后盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。2、BufferWB在使用前加入乙醇。

提取步骤：1、样品处理：A.材料收集存贮：

收集的新鲜材料如果不能马上使用，请将其放入液氮中冷却，并且Z终保存于-80℃，已经干燥了的材料可

以在室温中存贮。

B.如果条件允许的情况下，尽可能收集新鲜材料，新鲜材料中含有较少的多糖和多酚。

C.当从液体培养基中收集真菌时，首先通过离心的方式，将液体分离并收集到菌体。2、将100mg左右新鲜样品，或者不超过20mg干物质用液氮研磨；3、加入400μlBufferPI-A和4μlRNaseA（10mg/ml），确保研磨样品中不存在块状组织，块状组织比较难裂解，会降低DNA获得率，另外不要将BufferPI-A和RNaseA在使用前进行混合；4、65℃温育10~15min，期间颠倒混匀2~3次，此步用于裂解细胞，如果样品较难裂解，适当延长温育时间，但不超过1小时；5、加入130μlBufferPI-B混匀，并且在冰上冰浴5min（此步用于沉淀多糖、蛋白质）；6、推荐步骤：将裂解液离心5min，14000rpm（20000×g）；一些植物材料会在此步出现很多粘性物质，这些物质会在接下来的步骤中会剪切DNA，因此，Z理想的状态

是在此步过程中将这些物质移除，离心后，将上清转移至新的离心管中，对于真菌，沉淀物较少，可以忽略此

步骤。7、小心转移上一步所得到的液体到新离心管中；大约450μl液体能够被转移，对于一些物种来说可以少于450μl。8、加入1.5倍体积的BufferPI-C到裂解液中，并混匀；例如：加入400μl裂解液，加入BufferPI-C600μl，如果裂解液体积少于400μl，则按比例减少BufferPI-C的用量，加入BufferPI-C后会有少量沉淀生成，但不影响后续实验。※注：使用BufferPI-C后，盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。9、将上步所得液体加入到DNA纯化柱中（大约每次加入量650μl~700μl），大于8000rpm离心1min，将收集的废液遗弃，并重新将收集管套入纯化柱中进行下一步；10、重复步骤9，将剩余液体再加入到纯化柱中，大于8000rpm离心1min，弃掉废液及收集套管；11、将DNA纯化柱放入一个新的收集套管中，加入300μlBufferWB，大于8000rpm离心1min，弃掉废液并将DNA纯化柱重新放入套管中进行下一步；确认BufferWB中已经加入无水乙醇。12、加入500μlBufferWB到DNA纯化柱中，14000rpm（20000×g）离心2min，适当延长离心时间，致膜更加干燥；乙醇的存在对随后的实验有严重影响，因此膜的干燥很重要，离心后确保在进行洗脱前无乙醇的存在，随

后弃掉废液及收集管。

在使用BufferWB漂洗过后，DNA纯化柱膜仅应有轻微的颜色，在离心后，小心移走DNA纯化柱，确保不

与收集管碰到，以确保不会有乙醇影响。13、将DNA纯化柱加入到一个新的离心管中，悬空滴加50-100μlBufferEB到柱膜上，室温温育5min（15~25℃），大于8000rpm离心1min；用＞50μlBufferEB洗脱DNA可以提高DNA浓度，但降低了总DNA获得率。14、重复上一步骤。一个新的离心管可以用于收集第二次洗脱的DNA或者使用原来的收集管继续收集DNA。

注：如果次生代谢物及酚含量较多的物种，请向本公司购买BufferYCL，并咨询使用方法。

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