探讨小鼠ELISA试剂盒的七个操作步骤

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。小鼠ELISA试剂盒的操作步骤：
1、标准品的稀释与加样：小鼠ELISA试剂盒在酶标包被板上设标准品孔10孔，在diyi、第二孔中分别加标准品100μl，然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从diyi孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为6IU/L，4IU/L，2IU/L，1IU/L，0.5IU/L）。
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、小鼠ELISA试剂盒的洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
4、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
5、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
6、不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
7、小鼠ELISA试剂盒在标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。　

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