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- 近年来常见常用的检测氨基酸的液相方法不少,主要介绍以下几种常用的方法与氨基酸分析仪法进行比较:(一) OPA 法(邻苯二甲醛)( 反应机理略)*大的不足之处是: 做全分析时需配以其他技术一起使用,方可与带有仲氨基团的氨基酸进行反应。赖氨酸及胱氨酸衍生物荧光较弱,灵敏度低。 因为 OPA 是快速反应 剂,有些氨基酸反应极其不稳定, 特别是甘氨酸、赖氨 酸衍生物的信号衰减很快,一天变化很大 。从以往我们做的实验来看此方法的变异系数 CV% 一般为5%左右 ,个别的氨基酸如组氨酸可达 9% 左右 ,尤其对带有盐分的料氨基酸类样品特别不适合 ,因样品中带有的盐分直接 影响衍生(紫外法基线不好)。(二) PITC 法(异硫氰酸苯脂)此方法的重现性明显低于茚三酮法, *大的缺点是 :一个组分衍生后可生成2个以上的衍生物,而且和其它组分峰重叠,灵敏度比较低。由于有残留的衍生剂,柱效与柱寿命降低很快(做 200 左右样品),变异系数在 4% ,也偏大,个别氨基酸如组氨酸可达 8% ,某些氨基酸在24小时内即降解。(三) D-CL 法(丹酰氯)反应比较简单以5个mol/L 比例,在室温、避光条件下几时 分钟即可完成反应。缺点不足之处是: 衍生物对紫外比较敏感,反应必需要在 避光下进行,赖氨酸、组氨酸和胱氨酸均生成二级衍生物 影响准确测量。(四) 2、4-二硝基氟苯法此方法是比较常见的液相测定方法, *大的缺点是衍生剂峰比较大,对柱子危害比较厉害。组氨酸分离不好、组氨酸的二级衍生物与丝氨酸重叠,另一个峰柱效降低时完全溶入到前面苯丙峰中,直接影响定量,日间变化比较大。氨基酸分析仪与 HPLCHPLC常规比较氨基酸全自动分析仪常规GX液相色谱仪HPLC蛋白质水解物30min50 min生理体液110 min135 min分离95%-98%85%检测限度3poml100poml定量精确度CV≦1%CV≦3%操作简单复杂
《氨基酸分析仪法与HPLC法比较》来源:上海交大分析测试ZX 侯敬丽仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2006-08-07 11:36:43
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