****血清药物浓度的测定方法

目的：建立****血清药物浓度的测定方法。

方法：RP-HPLC法检测，Nova-PaK C18柱，流动相：甲醇-KH₂PO4（0.01mol/L,PH=3.50）（50：50）；柱温：25^OC；流量：1ml/min；检测波长：311nm。

结果：苯巴比妥、苯妥英钠与卡马西平线性范围分别为5-40 ug/ml，5-40 ug/ml和2.5-20 ug/ml，平均回收率分别为99.95%，99.36%和99.65%日内、日间RSD均小于5%,标准曲线相关性良好。   

结论：该法简便、经济，结果准确，适合临床应用。

关键词：SPE-HPLC，****，苯妥英钠，卡马西平，血药浓度,

Abstract:

Objective：To develop a method of concentration of blood for Phenobarbital,phenytion stodium, catbamazepine.

Methods：RP-HPLC  was adopted for the determination.

Results：By this method, the linear ranges of phenobarbital (PB)，DPH and carbamazepine (CBZ) were 1.6-12.8 ug/ml，1.6-12.8 ug/ml和0.8-6.4 ug/ml respectively. Theaverage recovery rate of PB and CBZ were 99. 95% and 99. 65% respectively. The relative standard deviations ( RSD) of within day and

inter一day were less than 5 %.The calibration curve presented good linearity.

Conclusion：It proves a simple, economical, accurate and sensitive method and suitable for clinical application.  

KEY WORDS：Phenobarbital, phenytion stodium ,catbamazepine ,Blood medicine density

癫痫是一种以神经系统功能失常为主要表现的常见综合征。患者常需长期服药才能控制发病,有的则要终生用药。****，苯妥英钠和卡马西平是临床*常用的有效抗癫痫药物。然而****，苯妥英钠和卡马西平ZL指数低,安全范围窄,个性差异大,若剂量和用法不当,可导致LX不佳或出现严重毒副反应,且不同厂家的产品存在生物利用度差异,其血药浓度与LX和毒性密切相关。因此,为了提高临床用药的有效性和安全性,用药过程中进行ZL药物血药浓度监测已达成共识。本文运用反相GX液相色谱法摸索同时测定****，苯妥英钠和卡马西平全血浓度的方法, 其操作简单，费时少，且利于保护色谱柱，为临床合理用药提供依据。

1.仪器与试药

1.1仪器

LC310GX液相色谱仪（包括LC-WS310色谱工作站" href="http://www.18show.cn/product/st621.html" target="_blank">色谱工作站，高压恒流泵，柱温箱，LC-WS310紫外检测器）；Accubond SPE C18柱（ODS 1ml:100mg）；BT125D分析天平" href="http://www.18show.cn/product/detail/2413219.html" target="_blank">电子分析天平（赛多利斯）；PHS-25酸度计（上海精科）；SHA-C型恒温水浴（巩义市予华）；超纯水机（南京易普易达）。

1.2 试药

****（国家麻醉品实验室）；苯妥英钠、卡马西平（sigma公司）；甲醇为色谱纯（美国tedia公司）；磷酸二氢钠，磷酸二氢钾均为分析纯；水为二次蒸馏水。

2. 方法与结果

2.1 色谱条件

Nova-pakC18柱（3.9min×150min,4mm）；

流动相：甲醇-KH2PO4（0.01mol/L,PH3.50）（50：50）；

柱温:25^OC;流量1ml/min;检测波长：311nm。

2.2 标准溶液的制备

　  分别精密称取PB,DPH,CBZ 适量，分置250ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成PB（200ug/ml）、DPH（200ug/ml）、CBZ（100ug/ml）标准贮备液，置４^OC冰箱保存备用。

2.3 样品液的制备

取含药血清0.5ml，加NaH₂PO₄缓冲液（0.1mol/L PH=3.20）0.5ml，混匀备用。

2.4　样品的预处理

取血清0.1ml，加PH7.6的磷酸盐缓冲液0.1ml，涡旋，加乙酸乙酯5.0ml，混匀离心，取提取液4ml，60^ｏC水浴吹干，加100ml流动相复溶、进样。

2.5 标准曲线及线性范围

分别准确吸取PB、DBH、CBZ标准贮备液100、200、400、600、800ul，依次分置于５支尖底试管中，水浴吹干。每管加无药血清５ml复溶，配成含PB、DPH、CBZ系列浓度标准血清，分别加入NaH₂PO₄缓冲液5ml，振荡混匀后按2.4项下操作。用外标法定量，得回归方程。

2.6 精密度和相对回收率实验

配置高、中、底浓度的含药血清标准系列，依2.4项下操作，分别于当日和连续５日测定，计算回收率及日内差和日间差。

3.  讨论

3.1    PB、CBZ、DPH均为常用抗癫痫药物，为提高LX，减少毒副作用，需要测定血清中药物浓度，本实验采用RP-HPLC法。99.95%，99.36%和99.65%

3.2   本实验中回收率为苯巴比妥99.95%、苯妥英钠99.63%与卡马西平99.65%，证明准确度较好，但相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）>2%，表明精密度误差较大，日内差与日间差又无明显区别，综合考虑以上因素，血液中影响因素较多，即使已离心提纯用血清做实验，与真实值仍有较大误差，加之这三种药个体差异较大，建议临床用药不能只看数据，要综合多种因素，谨慎用药。

3.3   在样品处理中，先用少量磷酸盐溶液沉淀蛋白，再用乙酸乙酯提取。此法综合了蛋白沉淀法和液- 液萃取法之长，血样加入缓冲溶液，使药物萃取时YZ药物的解离，提高监测指数。

3.4   应用乙酸乙酯提取血清中的3 种药物，其优点在于乙酸乙酯挥发快，提取效率高，可达到快速操作的目的。

3.5   癫痫为神经科的常见疾病，多数患者通过长期用药可以控制病情，但需制定合理的给YF案，使血药浓度控制在有效范围内。本文所建立的方法可同时测定3 种抗癫痫药物的血药浓度，操作简便，结果可靠，为医院常规监测提供了可靠手段，对其合用时的监测尤为方便。

结论

癫痫患者对药物反应（LX与毒性）的个体差异与药物的剂量关系不甚密切，而与药物在血浆中的浓度十分相关。血药浓度的高低，往往会直接影响到药理作用的强弱，因此展开抗癫痫药物的血浆浓度监测，能够为及时调整患者用药

剂量、改善病情、减少毒副反应提供科学依据。抗癫痫药物的测定方法有紫外分光光度法、薄层色谱分析、酶免疫法、荧光偏振免疫法和GX液相色谱法。目前认为GX液相色谱法具有微量、灵敏、精确、稳定、样品中药物不需经过结构改造、可以直接测出等特点，且具有能同时测定数种药物的优点，因此在抗癫痫药物的ZL药物浓度监测中越来越受人们的青睐。本文建立的反相GX液相色谱法同时测定人血清中DPH、PB、CBZ 3 种药物的浓度，快速、简便，结果可靠，且重现性好，可用于临床常规检查。

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