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- 电泳浓缩凝胶压缩原理-混合器技术文章
电泳电泳浓缩凝胶压缩原理-混合器技术文章
在不连续电泳中,样品在缓冲液中电泳,缓冲液中的含量较高。 pH 。此时,样品以负离子的形式存在,并且高度浓缩在浓缩的凝胶中( pH 略低于样本)。达到薄层提高分辨率的目的。
例如:要分离的样品是血清蛋白,用于浓缩凝胶 Ph6.7 的 Tris-HCl缓冲液 制备,电泳 缓冲 使用 ph8.3 Tris- 甘氨酸,准备就绪。
电泳开始后,我们要分离的样品蛋白质进入 pH6.7 缓冲液 游到正极。同时进行电泳 Buffer 中的甘氨酸,因为它的等电点是 6.0 因此,在此过程中,只有一小部分解体了( 0.1-1% )负离子游向正极。同时,浓缩凝胶中的 HCl 具有很大的离解度,几乎所有的氯离子都会释放出氯化物离子向正极移动。
根据电泳公式计算有效游泳率;离解度(α)和游泳速率( m 的乘积)等于有效游泳速率( m α)。在这种不连续电泳系统中,氯离子*的有效迁移率称为快离子,甘氨酸电离的负离子的有效迁移率称为慢离子,样品中各种组成蛋白的有效迁移率介于快离子和慢离子之间。
因此,在电泳开始时,快离子迅速迁移到正电极,而慢离子和样品蛋白离子的迁移滞后,因此有一线离子在快速离子的后面形成浓度。低低电导率区域。由于电导与电势梯度成反比,因此由于迁移率( m
因此,无法形成压缩现象的主要原因是:
1。 在浓缩凝胶中缺乏快速离子 缓冲区 是无效的。
第二, 缺乏速度离子,电泳 font> 缓冲区 的 pH 不适当。
三, 电泳样品的量也太多大,超过浓缩凝胶的缓冲容量 缓冲 。
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- 2007-04-22 10:11:46
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