人淋巴细胞分离液

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【导读】人淋巴细胞来源于人外周血，可根据不同实验目的可选择密度梯度离心法、吸附分离法或其它特殊分离方法。Böyum在密度梯度离心法的基础上提出通过使用Ficoll®甲泛影钠溶液离心快速分离...

人淋巴细胞来源于人外周血，可根据不同实验目的可选择密度梯度离心法、吸附分离法或其它特殊分离方法。Böyum在密度梯度离心法的基础上提出通过使用Ficoll®甲泛影钠溶液离心快速分离的方法，操作更方便、更快速。稀释的血液在Ficoll®甲泛影钠溶液中通过短时间的低速离心即可分层，红细胞和粒细胞沉降至管底、淋巴细胞和血小板在中间形成2个分层。
使用说明：
1.轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2.无菌转移3mlLSM到15ml离心管中。
3.混合2ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2ml生理盐水
4.仔细的将稀释血液加入3mlLSM（室温）于15ml离心管中，在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。
5.室温下400g离心15-30分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞。
6.吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7.吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中，室温离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160–260xg（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8.用平衡盐缓冲液清洗细胞，用适当的培养基重悬细胞。

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2004-08-13 09:23:10

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