小鼠外周血白细胞分离液试剂盒

WBC1092

说明书
（细胞培养及分子生物学专用）
【产品规格】
200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：

名称

产品规格

编号

A

小鼠外周血白细胞分离液

200ml

B

样本稀释液（赠品）

2010C1119

200ml

C

清洗液（赠品）

2010X1118

200ml

D

红细胞裂解液（赠品）

NH4CL2009

100ml

E

说明书

1份

【实验前准备】
A．适用仪器
Zda离心力可达1200g的水平转子离心机
B．耗材

产品名称

产品货号

产地

15ml离心管散装

339650

美国NUNC

15ml离心管架装

339651

美国NUNC

50ml离心管散装

339652

美国NUNC

50ml离心管架装

339653

美国NUNC

无菌胶头滴管或塑料滴管

【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
首先取抗凝血，根据样本量大小，分以下两种情况：
情况A：血液样本量小于5ml时，实验方法如下：
1.取一支15ml离心管，先加入5ml分离液
2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：如改
变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸

索，以达到Z理想分离效果。）
3.离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入10ml清洗液（产
品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心10min。重复洗涤2-3次，即得所需白细
胞。
4.如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操
作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。
情况B：血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：
1.取一支适当的离心管，先加入与样本等量的分离液。
2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（Zda离心力可至1000g），离心
20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心
时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z理想分离效果。加入血液样本后，样
本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
3.剩余步骤同“情况A”中步骤3与步骤4。
【注意事项】
1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z理想的实验结果，Z
好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后
分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验Z好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离
心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面
会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.分离液用量大于稀释后血液样本时，分离效果更佳。
4.当血液样本粘度过高需稀释时，Zyou稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：
2010C1119）1:1稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样
本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。
5.如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术以寻求帮助支持。
【储存条件及有效期】
18-25℃保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】

本实验白细胞提取率及纯度大于80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

【相关实验技术方案】
1.所获得白细胞的培养技术。
2.所获得白细胞的核酸提取技术。
3.所获得白细胞的鉴定方法
A.流式细胞技术
B.免疫组化技术
C.原位杂交技术
D.PCR技术
注：上述技术方案详情请登陆本公司：搜索“细胞分离、
纯化、扩增、鉴定及生物ZL技术手册”，并在说明书项目栏下下载使用。
【可能存在的问题及解决方法】
1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

出现情况

出现原因

建议解决方案

离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层

转速过小或离心时间过短

适当增减转速

离心后目的细胞存在于分离液中

转速过大或离心时间过长

适当增减转速

离心后白环层弥散

细胞密度过大

调整细胞密度

离心后白环层太浅或看不见

细胞密度过小

调整细胞密度

2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地
区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离
心时间，对离心转速进行调整。
3.本分离液依照国际标准，全部使用YY级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到Z理想分离效果，
离心力Z小不得小于400g，Zda不得大于1200g。离心时间以20-30min为准。

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