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- 【导读】人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)含量。实验原理本试剂盒...
人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)水平。用纯化的人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid),再与HRP标记的BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)浓度。
试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7终止液
6ml×1瓶
2酶标试剂
6ml×1瓶
8标准品(80pg/ml)
0.5ml×1瓶
3酶标包被板
12孔×8条
9标准品稀释液
1.5ml×1瓶
4样品稀释液
6ml×1瓶
10说明书
1份
5显色剂A液
6ml×1瓶
11封板膜
2张
6显色剂B液
6ml×1/瓶
12密封袋
1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40pg/ml
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
20pg/ml
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
10pg/ml
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
5pg/ml
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5pg/ml
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间Z好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔diyi孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
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- 2004-08-31 09:23:06
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